结核分枝杆菌PPE68基因真核表达质粒的构建及鉴定

靳志栋; 何永林; 徐蕾; 佘茜; 张丹; 张壮苗; 杨春

doi:10.13406/j.cnki.cyxb.2011.08.001

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结核分枝杆菌PPE68基因真核表达质粒的构建及鉴定

基础研究 | 更新时间：2024-01-17

- 结核分枝杆菌PPE68基因真核表达质粒的构建及鉴定
- Construction and identification of eukaryotic expression plasmid pBudCE4.1-PPE68 of Mycobacterium tuberculosis
- 重庆医科大学学报 2011年36卷第8期页码：907-910
- 作者机构：
  
  1. 重庆医科大学病原生物学教研室
  2. 重庆医科大学神经科学研究中心重庆市重点实验室
- 作者简介：
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金资助项目（编号:30771922、30901280）
- DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.2011.08.001
  中图分类号： R378.911
- 纸质出版日期：2011，
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[1]靳志栋,何永林,徐蕾,佘茜,张丹,张壮苗,杨春.结核分枝杆菌PPE68基因真核表达质粒的构建及鉴定[J].重庆医科大学学报,2011,36(08):907-910.

JIN Zhi-dong, HE Yong-lin, XU Lei, et al. Construction and identification of eukaryotic expression plasmid pBudCE4.1-PPE68 of Mycobacterium tuberculosis[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2011,36(8):907-910.
[1]靳志栋,何永林,徐蕾,佘茜,张丹,张壮苗,杨春.结核分枝杆菌PPE68基因真核表达质粒的构建及鉴定[J].重庆医科大学学报,2011,36(08):907-910. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.2011.08.001.

JIN Zhi-dong, HE Yong-lin, XU Lei, et al. Construction and identification of eukaryotic expression plasmid pBudCE4.1-PPE68 of Mycobacterium tuberculosis[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2011,36(8):907-910. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.2011.08.001.

摘要

目的:构建结核分枝杆菌（Mycobacteria tuberculosis

Mtb）PPE68基因的真核表达质粒

观察PPE68基因在小鼠巨噬细胞株RAW264.7中的表达。方法:将MtbPPE68基因克隆亚至真核表达质粒pBudCE4.1中

构建真核表达质粒pBudCE4.1-PPE68。以真核表达质粒pBudCE4.1-PPE68体外转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞

通过RT-PCR及Western blot法分别在转录水平及翻译水平检测PPE68基因的表达。结果:重组表达质粒经双酶切所切下的片段大小与理论值相符

测序结果与Gen-bank注录的PPE68基因序列一致。重组质粒瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7

用RT-PCR及Western blot法分别在转录水平及翻译水平检测PPE68基因的表达。结论:成功构建了PPE68基因的重组真核表达质粒pBudCE4.1-PPE68

并在小鼠巨噬细胞株RAW264.7中得到了成功表达。为对其免疫原性、免疫反应性及免疫保护作用的进一步研究奠定了基础。

Abstract

Objective:To construct and identify eukaryotic expression plasmid pBudCE4.1-PPE68 and observe its expression in murine macrophage RAW264.7 cells.Methods:MTB PPE68 gene was subcloned into pBudCE4.1 to construct recombinant plasmid pBudCE4.1-PPE68.The recombinant plasmid was transiently transfected into RAW264.7 cells

and the expression of PPE68 gene was detected by RT-PCR and Western blot.Results:The accurate eukaryotic recombinant plasmid pBudCE4.1-PPE68 was identified by restrict endonuclease.The PPE68 gene expression product in RAW264.7 cells was detected by RT-PCR、Western blotting.Conclusion:The recombinant plasmid pBudCE4.1-PPE68 was successfully constructed.The protein can be expressed in murine macrophage RAW264.7.The present study provides an experimental basis for further study of the PPE68 protein of Mycobacterium tuberculosis.

关键词

MtbPPE68巨噬细胞

Keywords

mycobacterium tuberculosisPPE68macrophage

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