RNA干扰联合Cre-loxP系统建立小鼠巨噬细胞RAW264.7 GR表达抑制模型

李晓清; 杨国汉; 李秀英; 钟瑜; 陈林; 徐晓玉

doi:10.13406/j.cnki.cyxb.2010.08.005

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RNA干扰联合Cre-loxP系统建立小鼠巨噬细胞RAW264.7 GR表达抑制模型

技术与方法 | 更新时间：2024-01-17

- RNA干扰联合Cre-loxP系统建立小鼠巨噬细胞RAW264.7 GR表达抑制模型
- RNAi and Cre-loxP system inhibits GR expression in macrophage RAW264.7 cells of mouse
- 重庆医科大学学报 2010年35卷第8期页码：1217-1220
- 作者机构：
  
  1. 第三军医大学附属大坪医院及野战外科研究所中医科
  2. 重庆医科大学药学院药理教研室
- 作者简介：
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金资助项目（编号:30472119）
- DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.2010.08.005
  中图分类号： R346
- 纸质出版日期：2010，
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[1]李晓清,杨国汉,李秀英,钟瑜,陈林,徐晓玉.RNA干扰联合Cre-loxP系统建立小鼠巨噬细胞RAW264.7 GR表达抑制模型[J].重庆医科大学学报,2010,35(08):1217-1220.

LI Xiao-qing, et al. RNAi and Cre-loxP system inhibits GR expression in macrophage RAW264.7 cells of mouse[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2010,35(8):1217-1220.
[1]李晓清,杨国汉,李秀英,钟瑜,陈林,徐晓玉.RNA干扰联合Cre-loxP系统建立小鼠巨噬细胞RAW264.7 GR表达抑制模型[J].重庆医科大学学报,2010,35(08):1217-1220. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.2010.08.005.

LI Xiao-qing, et al. RNAi and Cre-loxP system inhibits GR expression in macrophage RAW264.7 cells of mouse[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2010,35(8):1217-1220. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.2010.08.005.

摘要

目的:应用RNA干扰（RNA interference

RNAi）及Cre-loxP系统构建针对目的基因糖皮质激素受体（Glucocorticoid receptor

GR）表达抑制细胞模型。方法:设计并合成两对RNAi靶序列

连接至pBS/U6-Neo载体

联合应用Cre-loxP系统及RNAi构建针对目的基因GR的两对重组质粒

对构建的重组质粒采用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction

PCR）及测序的方法进行鉴定

将构建成功的重组质粒及Cre-ERT2质粒稳定共转染小鼠巨噬细胞RAW264.7

采用半定量逆转录聚合酶链反应（Reverse transcription polymerase chain reaction

RT-PCR）及Western blot的方法分别检测诱导RNAi表达后GR在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果:构建的两个针对目的基因GR的重组质粒可显著降低GR在mRNA及蛋白水平的表达。结论:联合采用RNAi及Cre-loxP系统能可控的稳定降低小鼠巨噬细胞RAW264.7中的GR表达。

Abstract

Objective:To inhibit GR expression in macrophage RAW264.7 cells of mouse by RNAi and Cre-loxP system.Methods:Two pairs of RNAi target sequence against GR gene were designed and inserted into pBS/U6-Neo vehicle.Recombinant plasmid constructed by Cre-loxP system and RNAi was identified by PCR and sequencing.The recombinant plasmid and Cre-ERT2 plasmid was transfected into the mouse macrophage RAW264.7 cells

in which GR expression was measured on mRNA and protein level respectively by RT-PCR and Western blot.Results:GR expression on mRNA and protein level was significantly inhibited by the two recombinant plasmid against GR gene.Conclusion:Combination using of RNAi and Cre-loxP system could inhabit GR expression in mouse macrophage RAW264.7 cells.

关键词

糖皮质激素受体（GR）RNA干扰Cre-loxP系统

Keywords

GRRNAiCre-loxPsystem

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