pcDNA3.1载体对内参基因表达影响分析

陈可; 王增产

doi:10.13406/j.cnki.cyxb.2010.06.001

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pcDNA3.1载体对内参基因表达影响分析

基础研究 | 更新时间：2024-01-17

- pcDNA3.1载体对内参基因表达影响分析
- Analysis of the effect of pcDNA3.1 on house keeping gene expression
- 重庆医科大学学报 2010年35卷第6期页码：816-818
- 作者机构：
  
  重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室
- 作者简介：
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金（编号:30600520）
- DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.2010.06.001
  中图分类号： Q78
- 纸质出版日期：2010，
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[1]陈可,王增产.pcDNA3.1载体对内参基因表达影响分析[J].重庆医科大学学报,2010,35(06):816-818.

CHEN Ke, et al. Analysis of the effect of pcDNA3.1 on house keeping gene expression[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2010,35(6):816-818.
[1]陈可,王增产.pcDNA3.1载体对内参基因表达影响分析[J].重庆医科大学学报,2010,35(06):816-818. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.2010.06.001.

CHEN Ke, et al. Analysis of the effect of pcDNA3.1 on house keeping gene expression[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2010,35(6):816-818. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.2010.06.001.

摘要

目的:研究转染质粒pcDNA3.1对内参基因表达影响差别

为今后在采用pcDNA3.1载体进行表达分析时内参基因的选择提供参考。方法:选用HepG2、HEK293、Hela、A549、QGY共5种细胞转染pcDNA3.1空载体质粒

转染后48h提取细胞总RNA荧光定量PCR法比较内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Glyceraldehyde-3-phosphste dehydrogenase

GAPDH）、肌动蛋白（β-actin）、18sRNA表达水平差异

提取细胞总蛋白

检测GAPDH、β-actin表达水平差异。结果:5种细胞在转染质粒pcDNA3.1后

内参基因转录和蛋白表达均出现不同程度的下降

其中以β-actin下降最为明显

GAPDH及18sRNA在转录水平下降幅度小

且下降程度接近。结论:pcDNA3.1质粒转染造成基因表达非特异性抑制

其中对管家基因β-actin影响较大

因此在应用pcDNA3.1来源载体进行基因功能分析时

不推荐使用β-actin作为内参基因。

Abstract

Objective:To investigate the effect of pcDNA3.1 vector on house keeping gene expression and set guide to further study work in using pcDNA3.1. Methods:5 cell lines were transfected with pcDNA3.1

48 h post transfection total RNA was extracted and applied for real time PCR to detect the RNA level of GAPDH、 β-actin、18sRNA difference.Meanwhile

extract total protein and analyze the GAPDH andβ-actin expression by Western blot.Results:RNA and protein levels all show of a decrease in 5 cell lines after transfection

with the most obviously β-actin.Conclusion:pcDNA3.1 might have non specifinhibition effect to cell

when using pcDNA3. 1 for gene function research

it is not recommend to use β- actin as reference gene.

关键词

pcDNA3.1内参基因转染转录表达

Keywords

pcDNA3.1House keeping GenetransfectionTranscriptionexpression

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