未知基因CGI-100的克隆及其真核表达载体的构建

黄凤霞; 张彦; 王伟佳

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未知基因CGI-100的克隆及其真核表达载体的构建

论著 | 更新时间：2024-01-17

- 未知基因CGI-100的克隆及其真核表达载体的构建
- Cloning of CGI-100 gene and reconstruction of its eukaryotic expressive vector
- 重庆医科大学学报 2007年第8期页码：785-788
- 作者机构：
  
  1. 重庆医科大学临床生化教研室临床检验诊断学重庆市重点实验室
  2. 重庆医科大学临床生化教研室临床检验诊断学重庆市重点实验室,重庆,400016
- 作者简介：
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金（No.30171150）
- DOI：
  中图分类号： R73-3
- 纸质出版日期：2007，
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[1]黄凤霞,张彦,王伟佳.未知基因CGI-100的克隆及其真核表达载体的构建[J].重庆医科大学学报,2007(08):785-788.

HUANG Fengxia, et al. Cloning of CGI-100 gene and reconstruction of its eukaryotic expressive vector[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2007,(8):785-788.
[1]黄凤霞,张彦,王伟佳.未知基因CGI-100的克隆及其真核表达载体的构建[J].重庆医科大学学报,2007(08):785-788. DOI：

HUANG Fengxia, et al. Cloning of CGI-100 gene and reconstruction of its eukaryotic expressive vector[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2007,(8):785-788. DOI：

摘要

目的:为探讨研究未知基因CGI-100的功能

克隆人CGI-100基因并构建其真核表达载体。方法:通过RT-PCR从人白血病K562细胞中克隆CGI-100基因全长编码区

将该cDNA片段亚克隆至载体pMD18-T SimpleT中

经测序鉴定后

用BamHⅠ和PstⅠ双酶切将目的cDNA片段定向克隆至相同处理的pIRES2-EGFP真核表达质粒中

然后经酶切、PCR鉴定和DNA序列测定三重鉴定方法对重组质粒进行鉴定。结果:经酶切、PCR及测序鉴定证实

CGI-100基因全长编码区cDNA被准确正向插入至pIRES2-EGFP质粒的酶切位点BamHⅠ和PstⅠ之间

未发现碱基突变或移位。结论:成功地构建并鉴定了含CGI-100基因全长编码区的真核表达质粒

为以后研究该基因的功能奠定了基础。

Abstract

Objective:To clone human CGI-100 gene and reconstruct its eukaryotic expressive vector for further investigation.Methods:The full coding domain sequence of human CGI-100 gene was cloned from human leukemic K562 cells with RT-PCR and was sub-cloned into pMD18-T Simple vector.After confirmed by DNA sequencing

the targeted DNA fragment

digested with BamHⅠand PstⅠ

was directionally cloned into eukaryotic expressive plasmid pIRES2-EGFP

then

the reconstructed plasmid was identified with enzyme digestion

PCR and sequencing.Results:It was demonstrated that the full coding domain sequence of human CGI-100 gene was accurately cloned into digestion sites between BamHⅠand PstⅠin pIRES2-EGFP without mutation and transposition.Conclusion:The reconstruction and verifying of eukaryotic expressive plasmid containing CGI-100 gene are successful

which establishes the foundation of further investigation.

关键词

CGI-100基因真核表达载体克隆

Keywords

CGI-100 geneEukaryotic expressive vectorclone

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