目的　构建一个鼠源性的抗脂多糖 (Lipopolysaccharide

LPS)单链噬菌体抗体库

以供进一步生物医学应用。方法　用纯LPS免疫BALB/c小鼠 4个星期后

从脾细胞中提取总RNA

用RT PCR技术扩增出小鼠抗体重链、轻链可变区基因 (VH

VL)

然后用Linker将VH

VL交联形成单链抗体可变区片段 (ScFv)。经NotI、SfiI双酶切后与经同样双酶切的pCANTAB5E噬菌粒载体相连

转化入感受态大肠杆菌TG1

构建鼠抗LPS单链噬菌体抗体库

并随机抽取转化后的 4个大肠杆菌TG1菌落

以检测外源DNA的转入情况。结果　ELISA法检测小鼠血清中抗LPS的效价为 1∶12 80 0。提取的总RNA浓度为 12 .3 813 μg/ml

纯度较好。扩增出的VH长约 3 4 0bp

VL长约 3 2 0bp

ScFv长约 80 0bp。转化入TG1后有约 1.9× 10 7个菌落

抽提 4个菌落后经SfiⅠ、NotⅠ双酶切的结果显示有 1个菌落的质粒转化进了外源DNA片段。结论　成功地构建出了一个有效库容量为 4.75× 10 6的鼠抗LPS单链噬菌体抗体库。