肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒的构建及评价

胥文春; 单幼兰; 许颂宵; 王虹; 陈淑惠; 尹一兵

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肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒的构建及评价

论著 | 更新时间：2024-01-17

- 肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒的构建及评价
- Construction and evaluation of a high effective GFP reporter plasmid for Streptococcus pneumoniae
- 重庆医科大学学报 2008年33卷第12期页码：1409-1413
- 作者机构：
  
  1. 重庆医科大学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室、重庆市重点实验室
  2. 重庆医科大学附属第二医院传染病实验室
- 作者简介：
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金资助项目（30471838,30400376）
- DOI：
  中图分类号： R378
- 纸质出版日期：2008，
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[1]胥文春,单幼兰,许颂宵,王虹,陈淑惠,尹一兵.肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒的构建及评价[J].重庆医科大学学报,2008,33(12):1409-1413.

XU Wen-chun, et al. Construction and evaluation of a high effective GFP reporter plasmid for Streptococcus pneumoniae[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2008,33(12):1409-1413.
[1]胥文春,单幼兰,许颂宵,王虹,陈淑惠,尹一兵.肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒的构建及评价[J].重庆医科大学学报,2008,33(12):1409-1413. DOI：

XU Wen-chun, et al. Construction and evaluation of a high effective GFP reporter plasmid for Streptococcus pneumoniae[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2008,33(12):1409-1413. DOI：

摘要

目的:构建一个可高效报告基因表达的绿色荧光蛋白（Green fluorescence protein

GFP）报告质粒

为采用差异荧光诱导（Differential fluorescence induction

DFI）技术筛选肺炎链球菌（Streptoccus pneumoniae

S.pn）体内诱导的毒力基因奠定基础。方法:酶切质粒pGreenTIR的SD-ENH-GFP片段

将其插入含氯霉素抗性基因的自杀质粒pEVP3中

构建以绿色荧光蛋白为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP。再将肺炎链球菌的溶血素基因（Pneumolysin

ply）上游约500bp片段插入到该质粒报告基因上游的多克隆位点中

得到质粒pEVP3-SDGFP-Ply

将其转化入肺炎链球菌TIGR4中

比较新建质粒pEVP3-SDGFP与同样处理质粒pEGFP-1（报告基因gfp前无SD及ENH序列）报告上游基因表达的情况。结果:通过体内、外实验证实新建质粒pEVP3-SDGFP不但可以报告肺炎链球菌溶血素基因的表达

并且其报告上游基因表达的能力明显强于质粒pEGFP-1。结论:所构建的质粒pEVP3-SDGFP可用于DFI筛选肺炎链球菌体内诱导基因所需启动子诱捕文库的构建。

Abstract

Objective: To construct a high effective GFP reporter plasmid for screening Streptoccus pneumoniae virulent genes by differential fluorescence induction. Methods: The SD-ENH-GFP region of plasmid pGreenTIR was cloned into a suicide plasmid pEVP3 which contains a cat gene encoding resistance protein to chloramphenicol

and a report plasmid pEVP3-SDGFP was constructed.To evaluate the function of this plasmid

a 500bp fragment of the pneumolysin gene (ply) of TIGR4 was coloned in the upstream of gfp and then was transformed into Streptococcus pneumoniae TIGR4. Results: The plasmid pEVP3-SDGFP could report the expression of ply both in vivo and in vitro

and was more effective than plasmid pEGFP-1 without SD and ENH sequence before gfp gene. Conclusion: Plasmid pEVP3-SDGFP can be used to construct the promoter-trap library which is needed in DFI.

关键词

肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒

Keywords

Streptococcus pneumoniagreen fluorescence proteinReporter plasmid

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