目的探讨具核梭杆菌（Fn）对人结直肠癌细胞株化疗耐药性的影响及相关的调控机制。方法本研究建立4个实验组，常规培养HCT-116细胞设为对照组；采用Fn标准株与HCT-116细胞共培养建立细菌—细胞共培养组（BCC组）；分别在对照组和BBC组基础上通过5-氟尿嘧啶（5-FU）干预，建立5-FU组和BCC+5-FU组。MTT试验检测各组细胞活力，细胞集落形成实验检测各组细胞增殖能力；流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。Western blot检测各组细胞化疗耐药相关蛋白MDR1、P-gp表达及Wnt2/β-catenin信号通路蛋白表达。结果 5-FU干预能有效降低结直肠癌细胞活力，抑制集落形成，并促进细胞凋亡，差异均有统计学意义（P<0.05）；与Fn共培养可以增强细胞活力，促进集落形成，减少细胞凋亡，差异均有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测结果显示，与对照组相比，BBC组结直肠癌细胞中MDR1、P-gp、Wnt2、β-catenin蛋白表达均明显增高（P<0.05）；5-FU干预处理后，BCC+5-FU组和5-FU组上述蛋白表达呈不同程度降低，但BCC+5-FU组上述蛋白表达明显高于5-FU组（P<0.05）。结论与Fn共培养可以促进结直肠癌细胞增殖，减少凋亡，并诱导5-FU化疗耐药，其潜在分子机制可能与Wnt/β-catenin信号通路过度激活有关。