目的 探究miR-100-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞迁移、侵袭和糖酵解的影响及作用机制。方法 收集NSCLC患者手术切除的癌组织和癌旁组织60对，RT-qPCR检测组织和细胞中miR-100-5p的表达，利用Lipofectamine 2000将miR-NC、miR-100-5p mimic、miR-100-5p inhibitor、pcNC、pcFGFR3质粒分别或联合转染入H1650细胞，划痕实验检测细胞迁移，Transwell实验检测细胞侵袭，相应试剂盒检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成和ATP含量，Seahorse XF糖酵解应激测试试剂盒和Seahorse XF细胞线粒体应激测试试剂盒检测细胞外酸化率（ECAR）和细胞耗氧率（OCR），双荧光素酶实验检测靶向关系，蛋白印迹法检测FGFR3蛋白表达水平。结果 miR-100-5p表达与NSCLC患者的性别、年龄和病理类型无关（P>0.05），而与吸烟史、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和分化程度有关（P<0.05）。miR-100-5p在NSCLC组织和细胞中低表达。与对照组相比，miR-100-5p mimic组划痕闭合率显著较低，侵袭细胞数目显著较少，葡萄糖摄取量、乳酸产生量、ATP含量及ECAR显著较低，OCR显著较高（P<0.01），miR-100-5p inhibitor组划痕闭合率显著较高，侵袭细胞数目显著较多，葡萄糖摄取量、乳酸产生量、ATP含量及ECAR显著较高，OCR显著较低（P<0.01）。miR-100-5p靶向下调FGFR3。共转染pc-FGFR3可逆转miR-100-5p过表达对NSCLC细胞迁移、侵袭和糖酵解的抑制作用（P<0.01）。结论 miR-100-5p通过靶向FGFR3 抑制NSCLC细胞迁移、侵袭和糖酵解。