目的　　构建正义和反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体

并分别转染人低转移肝癌细胞株MHCC97－L及高转移细胞株MHCC97－H和HCCLM6。方法　　采用基因重组技术

用EcoRⅠ从pcDNA3－Hpa质粒上切下约1．7 kb的人肝素酶全长cDNA片段

然后连入pIRES2－EGFP质粒的EcoRⅠ酶切位点上

经BamHⅠ酶切鉴定出正义和反义表达载体

并进一步测序确认。用脂质体法将肝素酶正义真核表达载体转入人低转移肝癌细胞株MHCC97－L

反义真核表达载体转入人高转移肝癌细胞株MHCC97－H和HCCLM6

24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果。结果　　经BamHⅠ酶切后

正义质粒形成5．3 kb和1．7 kb两条DNA片段

而反义重组质粒为6．5 kb和0．5 kb两条DNA片段

与理论计算值完全一致；测序结果进一步确认了方向的正确性。转染成功的肝癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光。结论　　成功构建了人肝素酶的正、反义真核表达载体

并成功转染人低、高转移肝癌细胞株

为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对肝癌细胞的转移能力的影响奠定了基础。