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报告噬菌体T6：：
Nluc 的构建与诊断性能评估：一种快速检测大肠杆菌尿路感染的新方法Construction of reporter phage T6::
Nluc and evaluation of its diagnostic performance: A novel method for rapid detection ofEscherichia coli urinary tract infections- 陆军军医大学学报 2026年48卷第2期 页码：147-157
- 作者机构：
1.解放军医学院，北京
2.解放军总医院第一医学中心检验科，北京
- 作者简介：
王驰，Email：wangchi2018@126.com
王成彬，Email：wangcb301@126.com
- 基金信息：国家自然科学基金项目面上项目(82172364);北京市自然科学基金项目(L244076)
DOI：10.16016/j.2097-0927.202510022
中图分类号： Q939.48;R446.5;R691.3收稿：2025-10-13，
修回：2025-12-10，
录用：2025-12-16，
纸质出版：2026-01-30
- 稿件说明：
移动端阅览
郝治云,赵强,李民伟,等.报告噬菌体T6::Nluc的构建与诊断性能评估：一种快速检测大肠杆菌尿路感染的新方法［J］.陆军军医大学学报，2026，48（02）：147-157.DOI：10.16016/j.2097-0927.202510022.
HAO Z Y，ZHAO Q，LI M W，et al.Construction of reporter phage T6：：Nluc and evaluation of its diagnostic performance： A novel method for rapid detection of Escherichia coli urinary tract infections［J］.J Army Med Univ，2026，48（02）：147-157.DOI：10.16016/j.2097-0927.202510022.
郝治云,赵强,李民伟,等.报告噬菌体T6::Nluc的构建与诊断性能评估：一种快速检测大肠杆菌尿路感染的新方法［J］.陆军军医大学学报，2026，48（02）：147-157.DOI：10.16016/j.2097-0927.202510022. DOI：
HAO Z Y，ZHAO Q，LI M W，et al.Construction of reporter phage T6：：Nluc and evaluation of its diagnostic performance： A novel method for rapid detection of Escherichia coli urinary tract infections［J］.J Army Med Univ，2026，48（02）：147-157.DOI：10.16016/j.2097-0927.202510022. DOI：
摘要
目的
2
构建大肠杆菌特异性的报告噬菌体T6：：
Nluc
，并评估其在尿路感染大肠杆菌快速诊断中的性能。
方法
2
采用CRISPR/Cas9系统联合同源重组技术，构建报告噬菌体T6：：
Nluc
。比较T6与T6：：
Nluc
的最佳感染复数、一步生长曲线和裂解效率等生物学特性。通过测定时间-发光曲线，确认T6：：
Nluc
的检测限、尿液基质对检测的影响。将T6：：
Nluc
与非大肠杆菌病原菌共培养后测定发光信号，探究检测特异性。从临床收集104株尿液分离的大肠杆菌，分析T6：：
Nluc
的检测覆盖率。收集437例临床尿液样本进行临床检测验证。
结果
2
T6：：
Nluc
构建成功，其一步生长曲线、最佳感染复数与T6存在差异，但裂解效率相似。T6：：
Nluc
可在40 min内检出≥10
4
CFU/mL的大肠杆菌标准菌株BL21，不受尿液基质影响，且表现出高度的检测特异性，可检出104株临床尿液大肠杆菌分离株中的51株（49.04%），在临床尿液样本中的检测灵敏度为48.84%，特异度为100.00。
结论
2
成功构建了报告噬菌体T6：：
Nluc
，并且可以灵敏、特异地检出尿路感染大肠杆菌，显著缩短了检测时间，有效提升了检测效率与准确性。
Abstract
Objective
2
To construct an
Escherichia coli
(
E. coli
)-specific reporter phage
T6::
Nluc
and evaluate its performance in the rapid diagnosis of
E. coli
-induced urinary tract infections.
Methods
2
T6::
Nluc
was constructed by the CRISPR/Cas9 system combined with homologous recombination technology. Then biological characteristics of T6 and T6::
Nluc
were systematically compared in terms of optimal multiplicity of infection (MOI)
one-step growth curves
and lysis efficiency. Time-luminescence curves were plotted to determine the limit of detection (LOD) and the impact of urine matrix. Luminescence quantification was performed to detect the specificity of the phage after being co-cultured with non-
E.coli
pathogens. In addition
104 strains of
E. coli
isolated from clinical urine samples were collected to analyze the detection coverage of T6::
Nluc
. Finally
437 clinical urine samples were obtained for clinical validation.
Results
2
The successful construction of reporter phage T6::
Nluc
was validated by Sanger sequencin
g. Its one-step growth curve and optimal MOI differed from those of T6
and the lysis efficiency remained comparable. T6::
Nluc
exhibited outstanding diagnostic performance
enabling the detection of ≥10⁴ CFU/mL
E. coli
within 40 min
with complete resistance to interference from urine matrix and excellent pathogen-specific recognition. Additionally
T6::
Nluc
successfully detected 51 out of 104 clinical
E. coli
isolates (49.04%). And the results of the detection in clinical urine samples indicated that the phage had a sensitivity of 48.84% and a specificity of 100.00 in the detection.
Conclusion
2
Reporter phage T6::
Nluc
is successfully constructed
and can sensitively and specifically detect
E. coli
causing urinary tract infections
significantly reducing detection time and enhancing efficiency and accuracy.
关键词
Keywords
references
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