新型分子胶LTL-04-061通过CRBN介导的泛素-蛋白酶体通路靶向降解OTULIN并显著抑制胃癌细胞增殖

刘振昆; 彭紫依; 向俊宇; 王斌; 蒋白山; 邱秋; 李玉红

doi:10.16016/j.2097-0927.202510007

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新型分子胶LTL-04-061通过CRBN介导的泛素-蛋白酶体通路靶向降解OTULIN并显著抑制胃癌细胞增殖

基础医学 | 更新时间：2026-02-23

- 新型分子胶LTL-04-061通过CRBN介导的泛素-蛋白酶体通路靶向降解OTULIN并显著抑制胃癌细胞增殖
- Novel molecular glue LTL-04-061 targets OTULIN for degradation via the CRBN-mediated ubiquitin-proteasome pathway and significantly suppresses gastric cancer cell proliferation
- 陆军军医大学学报 2026年48卷第3期页码：251-260
- 作者机构：
  
  1.陆军军医大学（第三军医大学）基础医学院细胞生物学教研室，重庆
  2.陆军军医大学（第三军医大学）大坪医院消化内科，消化系统肿瘤精准防治重庆市重点实验室，重庆
  3.武汉大学药学院，武汉大学免疫与代谢前沿科学中心，湖北武汉
  4.重庆市合川区人民医院消化内科，重庆
- 作者简介：
  
  邱秋，E-mail： 360894544@qq.com
  李玉红，E-mail： liyuhong@tmmu.edu.cn
- 基金信息：
  
  国家重点研发计划项目(2023YFC3402102);重庆市科卫联合医学科研项目(2020FYYX028);合川人医发（2024）109号邱秋登峰人才项目;of Hechuan People’s Hospital of Chongqing. Corresponding authors： LI Yuhong, E-mail： liyuhong@tmmu.edu.cn;QIU Qiu, E-mail, 360894544@qq.com
- DOI：10.16016/j.2097-0927.202510007
  中图分类号： R735.2;R966;R977.6
- 收稿：2025-10-09，
  
  修回：2026-01-14，
  
  录用：2026-01-16，
  
  纸质出版：2026-02-15
- 稿件说明：
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刘振昆，彭紫依，向俊宇，等.新型分子胶LTL-04-061通过CRBN介导的泛素-蛋白酶体通路靶向降解OTULIN并显著抑制胃癌细胞增殖［J］.陆军军医大学学报，2026，48（03）：251-260.DOI：10.16016/j.2097-0927.202510007.

LIU Z K，PENG Z Y，XIANG J Y，et al.Novel molecular glue LTL-04-061 targets OTULIN for degradation via the CRBN-mediated ubiquitin-proteasome pathway and significantly suppresses gastric cancer cell proliferation［J］.J Army Med Univ，2026，48（03）：251-260.DOI：10.16016/j.2097-0927.202510007.
刘振昆，彭紫依，向俊宇，等.新型分子胶LTL-04-061通过CRBN介导的泛素-蛋白酶体通路靶向降解OTULIN并显著抑制胃癌细胞增殖［J］.陆军军医大学学报，2026，48（03）：251-260.DOI：10.16016/j.2097-0927.202510007. DOI：

LIU Z K，PENG Z Y，XIANG J Y，et al.Novel molecular glue LTL-04-061 targets OTULIN for degradation via the CRBN-mediated ubiquitin-proteasome pathway and significantly suppresses gastric cancer cell proliferation［J］.J Army Med Univ，2026，48（03）：251-260.DOI：10.16016/j.2097-0927.202510007. DOI：

摘要

目的

筛选靶向卵巢肿瘤结构域线性链接特异性去泛素化酶（ovarian tumor domain deubiquitinase with linear linkage specificity，OTULIN）的新型分子胶，为胃癌治疗提供新策略。

方法

以高表达OTULIN的AGS-NC、SNU601-NC胃癌细胞及OTULIN基因敲除细胞（AGS-sgOTULIN、SNU601-sgOTULIN）为研究材料，设对照组（DMSO）、LTL-04-061浓度梯度组（0.1、0.3、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0 μmol/L）及蛋白酶体抑制剂干预组（MG-132/MLN4924联合5 μmol/L LTL-04-061），采用Western blot检测OTULIN蛋白表达水平，运用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction， qPCR）检测OTULIN的mRNA水平；利用免疫共沉淀（co-immunoprecipitation， Co-IP）验证蛋白相互作用；结合分子对接与100 ns分子动力学模拟（molecular dynamics simulation， MD）分析复合物构象；通过CCK-8法、细胞增殖实验、克隆形成实验评估分子胶对胃癌细胞恶性增殖的抑制作用。

结果

分子胶LTL-04-061在0.1~10.0 μmol/L浓度梯度下呈浓度依赖性降解OTULIN蛋白，5 μmol/L浓度时降解效果显著，且该浓度下OTULIN mRNA相对表达水平无显著变化（

0.05）；蛋白酶体抑制剂MG-132与MLN4924可阻断其降解作用，结合Co-IP实验结果提示该过程依赖CRBN介导的泛素-蛋白酶体通路；同时LTL-04-061可介导OTULIN与CRBN形成三元稳定复合物，并与关键残基HIS-339（OTULIN）、TRP-378/HIS-380（CRBN）存在强相互作用，MD模拟显示50 ns后复合物均方根偏差波动小于0.1 nm，80~100 ns时氢键数量维持较高水平，回旋半径数值保持稳定，无明显波动，表明复合物整体紧凑性未发生显著变化；溶剂可及表面积在此时间段内亦无明显波动，进一步证实复合物构象稳定，未出现明显的结构舒展或塌陷；LTL-04-061呈浓度依赖性抑制胃癌细胞的增殖与克隆形成；CCK-8实

验结果显示，LTL-04-061对AGS细胞和SNU601细胞的半数抑制浓度分别为8.95 μmol/L和11.70 μmol/L，并且OTULIN敲除后其抑制效果显著减弱（

0.01）。

结论

OTULIN在胃癌中发挥促癌作用，分子胶LTL-04-061通过CRBN依赖的泛素-蛋白酶体通路，靶向降解OTULIN蛋白，进而抑制肿瘤细胞恶性增殖，为胃癌分子靶向治疗提供新的候选前体药物。

Abstract

Objective

To screen novel molecular glues targeting ovarian tumor domain deubiquitinase with linear linkage specificity (OTULIN) and provide a new therapeutic strategy for gastric cancer.

Methods

Gastric cancer cell lines with high OTULIN expression (AGS-NC

SNU601-NC) and OTULIN-knockout cells (AGS-sgOTULIN

SNU601-sgOTULIN) were used. Experimental groups included: control (DMSO)

LTL-04-061 concentration gradients (0.1

0.3

1.0

3.0

5.0

7.0

10.0 μmol/L)

and proteasome inhibitor intervention (MG-132/MLN4924+5 μmol/L LTL-04-061). OTULIN protein expression was analyzed by Western blotting

while mRNA levels were quantified by qPCR. Protein interactions were validated by co-immunoprecipitation (Co-IP). Molecular docking and 100 ns molecular dynamics (MD) simulations were performed to analyze complex conformations. Anti-proliferative effects were assessed using CCK-8

cell proliferation

and colony formation assays.

Results

LTL-04-061 degraded OTULIN protein in a concentration-dependent manner (0.1 to 10.0 μmol/L)

with significant degradation at 5 μmol/L. At this concentration

OTULIN mRNA levels remained unchanged (

0.05). Degradation was blocked by MG-132/MLN4924

indicating dependence on the CRBN-mediated ubiquitin-proteasome pathway. Co-IP confirmed LTL-04-061-induced OTULIN-CRBN ternary complex formation. Key interactions involved OTULIN HIS339 and CRBN TRP378/HIS380. MD simulations showed stable complex conformation after 50 ns (RMSD fluctuation

0.1 nm)

sustained hydrogen bonds (80 to 100 ns)

and stable radius of gyration (Rg) and solvent-accessible surface area (SASA)

indicati

ng no structural expansion/collapse. LTL-04-061 concentration-dependently suppressed gastric cancer cell proliferation and colony formation. CCK-8 assays revealed IC

values of 8.95 μmol/L (AGS) and 11.70 μmol/L (SNU601). OTULIN knockout significantly attenuated this inhibition (

0.01).

Conclusion

OTULIN exerts pro-oncogenic effects in gastric cancer. The molecular glue LTL-04-061 targets OTULIN for CRBN-dependent ubiquitin-proteasomal degradation

thereby suppressing malignant proliferation. This identifies LTL-04-061 as a promising precursor for molecularly targeted gastric cancer therapy.

关键词

Keywords

references

郑荣寿，陈茹，韩冰峰，等 . 2022年中国恶性肿瘤流行情况分析［J］. 中华肿瘤杂志， 2024 ， 46 （ 3 ）： 221 - 231 . DOI： 10.3760/cma.j.cn112152-20240119-00035 http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.cn112152-20240119-00035 .

ZHENG R S ， CHEN R ， HAN B F ， et al . Cancer incidence and mortality in China， 2022 ［J］. Chin J Oncol ， 2024 ， 46 （ 3 ）： 221 - 231 . DOI： 10.3760/cma.j.cn112152-20240119-00035 http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.cn112152-20240119-00035 .

BRAY F ， LAVERSANNE M ， SUNG H ， et al . Global cancer statistics 2022： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries ［J］. CA Cancer J Clin ， 2024 ， 74 （ 3 ）： 229 - 263 . DOI： 10.3322/caac.21834 http://dx.doi.org/10.3322/caac.21834 .

王斌，王涛 . 胃癌的科学预防、早期诊断与精准治疗［J］. 陆军军医大学学报， 2025 ， 47 （ 5 ）： 385 - 395 . DOI： 10.16016/j.2097-0927.202501072 http://dx.doi.org/10.16016/j.2097-0927.202501072 .

WANG B ， WANG T . Effective prevention， early diagnosis and precise treatment of gastric cancer ［J］. J Army Med Univ ， 2025 ， 47 （ 5 ）： 385 - 395 . DOI： 10.16016/j.2097-0927.202501072 http://dx.doi.org/10.16016/j.2097-0927.202501072 .

彭仕银，谭玉婷，薛锐，等 . 肠型胃癌的超级增强子重塑特征及上调迁移诱导蛋白CEMIP表达的作用研究［J］. 陆军军医大学学报， 2025 ， 47 （ 5 ）： 396 - 406 . DOI： 10.16016/j.2097-0927.202407057 http://dx.doi.org/10.16016/j.2097-0927.202407057 .

PENG S Y ， TAN Y T ， XUE R ， et al . Remodeling characteristics of super-enhancers in intestinal gastric cancer and their roles in upregulating CEMIP expression ［J］. J Army Med Univ ， 2025 ， 47 （ 5 ）： 396 - 406 . DOI： 10.16016/j.2097-0927.202407057 http://dx.doi.org/10.16016/j.2097-0927.202407057 .

薛锐，潘雨薇，谭玉婷，等 . 胃黏膜高级别上皮内瘤变组织的增强子重塑及其对增殖相关基因CD24表达的影响［J］. 陆军军医大学学报， 2025 ， 47 （ 5 ）： 426 - 434 . DOI： 10.16016/j.2097-0927.202408113 http://dx.doi.org/10.16016/j.2097-0927.202408113 .

XUE R ， PAN Y W ， TAN Y T ， et al . Remodeling of enhancers in high-grade epithelial dysplasia of gastric mucosa and its effect on expression of proliferation-related gene CD24 ［J］. J Army Med Univ ， 2025 ， 47 （ 5 ）： 426 - 434 . DOI： 10.16016/j.2097-0927.202408113 http://dx.doi.org/10.16016/j.2097-0927.202408113 .

杜艾贝，任原锋，储召乐，等 . 胃印戒细胞癌的H3K27me3沉默子重塑特征及转录调控功能［J］. 陆军军医大学学报， 2025 ， 47 （ 5 ）： 417 - 425 . DOI： 10.16016/j.2097-0927.202407095 http://dx.doi.org/10.16016/j.2097-0927.202407095 .

DU A B ， REN Y F ， CHU Z L ， et al . Remodeling characteristics of H3K27me3-marked silencers in gastric signet-ring cell carcinoma and its transcriptional regulatory function ［J］. J Army Med Univ ， 2025 ， 47 （ 5 ）： 417 - 425 . DOI： 10.16016/j.2097-0927.202407095 http://dx.doi.org/10.16016/j.2097-0927.202407095 .

BRUNO P S ， ARSHAD A ， GOGU M R ， et al . Post-translational modifications of proteins orchestrate all hallmarks of cancer ［J］. Life ， 2025 ， 15 （ 1 ）： 126 . DOI： 10.3390/life15010126 http://dx.doi.org/10.3390/life15010126 .

ZHOU X F ， SUN S C . Targeting ubiquitin signaling for cancer immunotherapy ［J］. Signal Transduct Target Ther ， 2021 ， 6 （ 1 ）： 16 . DOI： 10.1038/s41392-020-00421-2 http://dx.doi.org/10.1038/s41392-020-00421-2 .

POPOVIC D ， VUCIC D ， DIKIC I . Ubiquitination in disease pathogenesis and treatment ［J］. Nat Med ， 2014 ， 20 （ 11 ）： 1242 - 1253 . DOI： 10.1038/nm.3739 http://dx.doi.org/10.1038/nm.3739 .

WANG W ， LI M Q ， PONNUSAMY S ， et al . ABL1-dependent OTULIN phosphorylation promotes genotoxic Wnt/β-catenin activation to enhance drug resistance in breast cancers ［J］. Nat Commun ， 2020 ， 11 （ 1 ）： 3965 . DOI： 10.1038/s41467-020-17770-9 http://dx.doi.org/10.1038/s41467-020-17770-9 .

SONG K ， CAI X F ， DONG Y Z ， et al . Epsins 1 and 2 promote NEMO linear ubiquitination via LUBAC to drive breast cancer development ［J］. J Clin Invest ， 2021 ， 131 （ 1 ）： e129374 . DOI： 10.1172/JCI129374 http://dx.doi.org/10.1172/JCI129374 .

JO T ， NISHIKORI M ， KOGURE Y ， et al . LUBAC accelerates B-cell lymphomagenesis by conferring resistance to genotoxic stress on B cells ［J］. Blood ， 2020 ， 136 （ 6 ）： 684 - 697 . DOI： 10.1182/blood.2019002654 http://dx.doi.org/10.1182/blood.2019002654 .

DAMGAARD R B ， JOLIN H E ， ALLISON M E D ， et al . OTULIN protects the liver against cell death， inflammation， fibrosis， and cancer ［J］. Cell Death Differ ， 2020 ， 27 （ 5 ）： 1457 - 1474 . DOI： 10.1038/s41418-020-0532-1 http://dx.doi.org/10.1038/s41418-020-0532-1 .

KULATHU Y ， KOMANDER D . Atypical ubiquitylation： the unexplored world of polyubiquitin beyond Lys48 and Lys63 linkages ［J］. Nat Rev Mol Cell Biol ， 2012 ， 13 （ 8 ）： 508 - 523 . DOI： 10.1038/nrm3394 http://dx.doi.org/10.1038/nrm3394 .

STIEGLITZ B ， MORRIS-DAVIES A C ， KOLIOPOULOS M G ， et al . LUBAC synthesizes linear ubiquitin chains via a thioester intermediate ［J］. EMBO Rep ， 2012 ， 13 （ 9 ）： 840 - 846 . DOI： 10.1038/embor.2012.105 http://dx.doi.org/10.1038/embor.2012.105 .

温海慧，顾玉超，刘琴，等 . 去线性泛素化酶OTULIN促进胃癌细胞的有氧糖酵解及增殖［J］. 肿瘤， 2023 ， 43 （ 12 ）： 905 - 919 . DOI： 10.3781/j.issn.1000-7431.2023.2307-0369 http://dx.doi.org/10.3781/j.issn.1000-7431.2023.2307-0369 .

WEN H H ， GU Y C ， LIU Q ， et al . The deubiquitinase OTULIN promotes aerobic glycolysis and proliferation of gastric cancer cells ［J］. Tumor ， 2023 ， 43 （ 12 ）： 905 - 919 . DOI： 10.3781/j.issn.1000-7431.2023.2307-0369 http://dx.doi.org/10.3781/j.issn.1000-7431.2023.2307-0369 .

HUANG Z T ， ZHANG Z Y ， TU Y Y ， et al . Integrated single-cell and transcriptome sequencing analyses develop a ubiquitination-associated signature in gastric cancer and identified OTULIN as a novel biomarker ［J］. Front Biosci ， 2023 ， 28 （ 11 ）： 304 . DOI： 10.31083/j.fbl2811304 http://dx.doi.org/10.31083/j.fbl2811304 .

WANG Z ， YAN M S ， YE L G ， et al . VHL suppresses autophagy and tumor growth through PHD1-dependent Beclin1 hydroxylation ［J］. EMBO J ， 2024 ， 43 （ 6 ）： 931 - 955 . DOI： 10.1038/s44318-024-00051-2 http://dx.doi.org/10.1038/s44318-024-00051-2 .

LIU Y F ， BAI J Y ， LI D ， et al . Routes to molecular glue degrader discovery ［J］. Trends Biochem Sci ， 2025 ， 50 （ 2 ）： 134 - 142 . DOI： 10.1016/j.tibs.2024.12.006 http://dx.doi.org/10.1016/j.tibs.2024.12.006 .

WEI D ， WANG H L ， ZENG Q H ， et al . Discovery of potent and selective CDK9 degraders for targeting transcription regulation in triple-negative breast cancer ［J］. J Med Chem ， 2021 ， 64 （ 19 ）： 14822 - 14847 . DOI： 10.1021/acs.jmedchem.1c01350 http://dx.doi.org/10.1021/acs.jmedchem.1c01350 .

YANG Q ， ZHAO J Y ， CHEN D ， et al . E3 ubiquitin ligases： styles， structures and functions ［J］. Mol Biomed ， 2021 ， 2 （ 1 ）： 23 . DOI： 10.1186/s43556-021-00043-2 http://dx.doi.org/10.1186/s43556-021-00043-2 .

BÉKÉS M ， LANGLEY D R ， CREWS C M . PROTAC targeted protein degraders： the past is prologue ［J］. Nat Rev Drug Discov ， 2022 ， 21 （ 3 ）： 181 - 200 . DOI： 10.1038/s41573-021-00371-6 http://dx.doi.org/10.1038/s41573-021-00371-6 .

CHEN L ， HUANG L ， WEN W Q ， et al . Selective and potent molecular glue degraders for NIMA-related kinase 7 ［J］. Angew Chem Int Ed ， 2025 ， 64 （ 12 ）： e202500169 . DOI： 10.1002/anie.202500169 http://dx.doi.org/10.1002/anie.202500169 .

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