装甲IL15或IL15受体连接体增强靶向CD19的CAR-NK细胞增殖与抗肿瘤活性

于梦圆; 刘秀盈; 章笑甜; 王佳颖; 凌志明; 王建勋

doi:10.16016/j.2097-0927.202507093

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装甲IL15或IL15受体连接体增强靶向CD19的CAR-NK细胞增殖与抗肿瘤活性

基础医学 | 更新时间：2025-12-24

- 装甲IL15或IL15受体连接体增强靶向CD19的CAR-NK细胞增殖与抗肿瘤活性
- Armored IL15 or IL15 receptor adaptors enhance proliferation and anti-tumor activity of CD19-targeted CAR-NK cells
- 陆军军医大学学报 2025年47卷第23期页码：2903-2912
- 作者机构：
  
  北京中医药大学生命科学学院，北京
- 作者简介：
  
  王建勋，E-mail： Jianxun.Wang@bucm.edu.cn
- 基金信息：
  
  高层次人才科研启动经费项目(9011451310032)
- DOI：10.16016/j.2097-0927.202507093
  中图分类号： R392.2;R73-362;R733.1
- 收稿：2025-07-28，
  
  修回：2025-11-17，
  
  录用：2025-11-24，
  
  纸质出版：2025-12-15
- 稿件说明：
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于梦圆，刘秀盈，章笑甜，等.装甲IL15或IL15受体连接体增强靶向CD19的CAR-NK细胞增殖与抗肿瘤活性［J］.陆军军医大学学报，2025，47（23）：2903-2912.DOI：10.16016/j.2097-0927.202507093.

YU M Y，LIU X Y，ZHANG X T，et al.Armored IL15 or IL15 receptor adaptors enhance proliferation and anti-tumor activity of CD19-targeted CAR-NK cells［J］.J Army Med Univ，2025，47（23）：2903-2912.DOI：10.16016/j.2097-0927.202507093.
于梦圆，刘秀盈，章笑甜，等.装甲IL15或IL15受体连接体增强靶向CD19的CAR-NK细胞增殖与抗肿瘤活性［J］.陆军军医大学学报，2025，47（23）：2903-2912.DOI：10.16016/j.2097-0927.202507093. DOI：

YU M Y，LIU X Y，ZHANG X T，et al.Armored IL15 or IL15 receptor adaptors enhance proliferation and anti-tumor activity of CD19-targeted CAR-NK cells［J］.J Army Med Univ，2025，47（23）：2903-2912.DOI：10.16016/j.2097-0927.202507093. DOI：

摘要

目的

构建靶向CD19的装甲白细胞介素15（interleukin 15，IL15）或IL15受体连接体（receptor-linker-IL15，RLI）嵌合抗原受体NK细胞（chimeric antigen receptor NK cell，CAR-NK），并进行CAR-NK细胞体外增殖与抗肿瘤活性的初步验证。

方法

培养人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞（NK92和NK92MI），并用逆转录病毒载体颗粒制备靶向CD19且装甲IL15或RLI的CAR-NK细胞。采用ELISA法检测CAR-NK细胞IL15分泌水平、CFSE法检测CAR-NK细胞的增殖能力。培养人B淋巴白血病细胞Nalm6-GFP-Luc和过表达人类CD19蛋白的人结肠癌细胞hCD19-SW620-GFP-Luc，并检测其表面CD19靶抗原的表达水平。在评估CAR-NK抗肿瘤活性时，使用荧光素酶发光法检测4或12 h时CAR-NK细胞在不同效应细胞与靶细胞数量比例时的杀伤效率，并利用流式细胞术检测CAR-NK细胞肿瘤杀伤时表面CD107a表达，同时使用CBA法检测其细胞因子释放水平。

结果

成功构建了装甲IL15或RLI的NK92/NK92MI-CD19 CAR细胞，且装甲IL15或RLI的细胞组IL15分泌水平显著高于没有装甲的细胞（

0.01）。在无IL-2刺激的情况下，IL15或RLI能够增强CAR-NK增殖能力（

0.05）。Nalm6-GFP-Luc和hCD19-SW620-GFP-Luc细胞表面CD19高表达，阳性率分别为100.0%和99.7%，可以作为CD19 CAR的靶细胞。IL15或RLI能够增强

NK92/NK92MI细胞来源的CAR-NK细胞的杀伤能力（

0.05），以及CD107a的表达水平。装甲IL15或RLI的NK92-CD19 CAR细胞有更高的IL2、IL10、IL6、TNF-α、sFasL、IFN-γ、Granulysin释放水平（

0.05），而装甲IL15或RLI的NK92MI-CD19 CAR细胞有更高的IL2、IL10、IL6、TNF-α、sFas、IFN-γ、Granzyme A、Granzyme B、Perforin、Granulysin释放水平（

0.05）。

结论

装甲IL15或RLI的NK92/NK92MI-CD19 CAR细胞具有良好的抗肿瘤活性，IL15细胞因子与CAR-NK联用具有强大的临床抗肿瘤治疗应用潜力。

Abstract

Objective

To construct CD19-targeted chimeric antigen receptor natural killer (CAR-NK) cells armored with interleukin15 (IL15) or IL15 receptor-linker (RLI) and preliminarily validate their proliferative capacity and anti-tumor activity in vitro.

Methods

Natural killer cells (NK92 and NK92MI) from patients with human malignant non-Hodgkin lymphoma were cultured

and CD19-targeted CAR-NK cells armored with IL15 or RLI were prepared using retroviral vector particles. IL15 secretion was measured by ELISA

and proliferative capacity was assessed via CFSE dilution assays. Human B-lymphocytic leukemia cells (Nalm6-GFP-Luc) and human colon cancer cells overexpressing CD19 (hCD19-SW620-GFP-Luc) were cultured

with surface CD19 expression confirmed (>99% positivity for both). Anti-tumor activity was evaluated by measuring cytotoxicity at effector-to-target (E:T) ratios using luciferase-based assays (4/12 h)

detecting surface CD107a expression via flow cytometry

and quantifying cytokine release using CBA assays.

Results

NK92/NK92MI-CD19 CAR cells armored with IL15 or RLI were successfully generated. IL15 secretion was significantly higher in armored groups versus non-armored controls (

0.01). Without IL-2 stimulation

IL15/RLI enhanced CAR-NK proliferation (

0.05). Both armored designs significantly increased tumor-killing efficiency (

0.05) and CD107a degranulation. IL15/RLI-arm

ored NK92-CD19 CAR cells exhibited elevated release of IL2

IL10

IL6

TNF-α

sFas

IFN-γ

and Granulysin (

0.05)

while armored NK92MI-CD19 CAR cells showed additional increases in Granzyme A

Granzyme B

and Perforin (

0.05).

Conclusion

IL15/RLI-armored NK92/NK92MI-CD19 CAR cells demonstrate potent anti-tumor activity

supporting their combined clinical therapeutic potential for tumors.

关键词

Keywords

references

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