佛手柑内酯延缓骨关节炎软骨细胞衰老

叶元兰; 刘恺文; 潘一鸣; 郭风劲

doi:10.16016/j.2097-0927.202408075

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佛手柑内酯延缓骨关节炎软骨细胞衰老

药学 | 更新时间：2025-02-26

- 佛手柑内酯延缓骨关节炎软骨细胞衰老
- Bergapten alleviates senescence of chondrocytes in osteoarthritis
- 陆军军医大学学报 2025年47卷第3期页码：262-274
- 作者机构：
  
  重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室，重庆
- 作者简介：
  
  郭风劲，E-mail： guo.fengjin@cqmu.edu.cn
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金面上项目(82272550)
- DOI：10.16016/j.2097-0927.202408075
  中图分类号： R285.6;R329.28;R684.3
- 收稿日期：2024-08-19，
  
  修回日期：2024-09-24，
  
  纸质出版日期：2025-02-15
- 稿件说明：
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叶元兰，刘恺文，潘一鸣，等.佛手柑内酯延缓骨关节炎软骨细胞衰老［J］.陆军军医大学学报，2025，47（03）：262-274.DOI：10.16016/j.2097-0927.202408075.

YE Y L，LIU K W，PAN Y M，et al.Bergapten alleviates senescence of chondrocytes in osteoarthritis［J］.J Army Med Univ，2025，47（03）：262-274.DOI：10.16016/j.2097-0927.202408075.
叶元兰，刘恺文，潘一鸣，等.佛手柑内酯延缓骨关节炎软骨细胞衰老［J］.陆军军医大学学报，2025，47（03）：262-274.DOI：10.16016/j.2097-0927.202408075. DOI：

YE Y L，LIU K W，PAN Y M，et al.Bergapten alleviates senescence of chondrocytes in osteoarthritis［J］.J Army Med Univ，2025，47（03）：262-274.DOI：10.16016/j.2097-0927.202408075. DOI：

摘要

目的

基于网络药理学、分子对接技术并结合体外实验探讨佛手柑内酯（Bergapten）治疗骨关节炎（osteoarthritis，OA）的作用与机制。

方法

检索Super-Pred、Swiss Target Prediction、Drug Bank等相关数据库获取佛手柑内酯的功能靶点和OA疾病相关作用靶点，将靶点通过Venny 2.1.0进行交集，利用STRING数据库进行蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）分析，利用AutoDock Vina软件进行分子对接。在C28/I2细胞中进行体外验证实验，CCK-8检测佛手柑内酯对C28/I2细胞增殖活性的影响，RT-qPCR和细胞免疫荧光检测增殖凋亡、炎症和衰老相关分泌表型（senescence associated secretory phenotype，SASP）因子的表达情况。使用细胞衰老β-半乳糖苷酶（senescence-associated β-galactosidase，SA-β-Gal）染色试剂盒检测SA-β-Gal水平的变化。

结果

筛选得到145个佛手柑内酯治疗OA的潜在作用靶点。PPI分析发现HSP90AA1、EGFR、HIF1A、PIK3CA 4个潜在核心靶点，且分子对接可形成较稳定的复合物。CCK-8发现，10 μmol

L佛手柑内酯处理48 h，C28/I2细胞的存活率最高（

0.05）。细胞免疫荧光、RT-qPCR和Western Blot实验显示，佛手柑内酯处理后，细胞增殖标志物PCNA、CCND1和CCNE1的表达增加（

0.05），而凋亡指标Caspase3和BAX的表达降低（

0.05）。同时，佛手柑内酯处理后，IL-1β诱导的炎性因子IL-6和TNF-α的表达降低，而抗炎因子IL-4和IL-10的表达增加（

0.05）。SASP因子P16、P21

、

MMP9和MMP13的表达也显著减少（

0.05）。Sa-β-Gal染色显示，IL-1β诱导后C28/I2细胞的β-半乳糖苷酶水平显著增加（

0.05），而佛手柑内酯处理后，β-半乳糖苷酶染色的阳性细胞率显著降低（

0.05）。

结论

佛手柑内酯可降低IL-1β刺激的软骨细胞中的SASP因子IL-6、TNF-α、P16、P21

、

MMP9、MMP13等的表达，从而在延缓OA进展中发挥其抗炎、抗衰老的作用。

Abstract

Objective‍

‍To investigate the role and mechanism of bergapten in treating osteoarthritis (OA) based on network pharmacology

molecular docking and in vitro experiments.

Methods‍

‍The functional targets of bergapten and the related targets of OA disease were obtained by searching Super-Pred

Swiss Target Prediction

Drug Bank. The obtained targets were intersected with Venny2.1.0

protein-protein interaction (PPI) analysis was performed using the STRING database

and molecular docking was conducted by AutoDock Vina. Subsequently

human chondrocyte C28/I2 cells were subjected in the following validation experiments. After the cells were treated with 0~50 μmol/L bergapten for 24

48 or 72 h

CCK-8 assay

RT-qPCR and immunofluorescence assay were used to detect the proliferation and apoptosis

and the expression of the molecules related to proliferation

inflammation and senescence (senescence associated secretory phenotype

SASP). Senescence β-galactosidase (SA-β-Gal) staining kit was employed to detect the change of SA-β-Gal level in the cells.

Results‍

There obtained 145 potential targets of bergapten for OA. PPI analysis revealed 4 potential core targets

HSP90AA1

EGFR

HIF1A

and PIK3CA

and they could form relatively stable complex with bergapten. CCK-8 assay showed that 10 μmol/L bergapten treatment for 48 h resulted in the highest proliferative activity of C28/I2 cells (P<0.05). Immunofluorescence assay

RT-qPCR and Western blotting indicated that bergapten treatment induced significant increases in the expression of cell proliferation markers such as PCNA

CCND1 and CCNE1 (P<0.05)

while decreases in the expression of apoptosis markers Caspase3 and BAX (P<0.05). Meanwhile

the expression levels of IL-1β-induced inflammatory factors IL-6 and TNF-α were reduced

while those of anti-inflammatory factors IL-4 and IL-10 were elevated after bergapten treatment (P<0.05). The levels of SASP factors

such as P16

P21

MMP9 and MMP13 were also significantly declined (P<0.05). SA-β-Gal staining displayed that the level of SA-β-Gal in C28/I2 cells was significantly enhanced after IL-1β induction (P<0.05)

while bergapten treatment could decrease the positive cell rate of the staining (P<0.05).

Conclusion‍

Bergapten can reduce the expression of SASP factors such as IL-6

TNF-α

P16

P21

MMP9 and MMP13 in IL-1β-stimulated chondrocytes

and thus exerts its anti-inflammatory and anti-aging effects in delaying the progression of OA.

关键词

Keywords

references

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