目的　采用RNA干扰 (RNAinterference

RNAi)技术

通过构建人糖皮质激素受体α(glucocorticoidreceptorα

GRα)基因的特异性siRNA(smallinterfereRNA)真核表达载体

体外观察对GRα基因的沉默作用及生物学效应。方法　采用基因克隆技术

将合成的发卡样特异性GRα干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体 (pPUR/U6)

构建GRαsiRNA的表达载体

转染体外ECV 3 0 4细胞

48h后观测胞内GRα蛋白水平 (Westernblot)及对LPS刺激后细胞因子产生的影响作用。结果　①成功构建发卡样GRαsiRNA真核表达载体 (pPUR/U6 GRαsiRNA) ;②pPUR/U6 GRαsiRNA转染 (脂质体法 )ECV 3 0 4细胞

48h后明显下调胞内GRα蛋白水平 ;③转染pPUR/U6 GRαsiRNA的细胞

在LPS刺激后

其TNF α、IL 1β的表达释放显著高于空载体对照组。结论　该RNA干扰真核表达载体能明显干扰GRα蛋白的表达、释放

结果促进了LPS刺激后炎性细胞因子的表达释放。进一步说明严重创伤所引起的糖皮质激素受体下调是机体应激紊乱的重要原因。