目的　构建人心肌营养素 1重组腺病毒载体

以期用于神经系统退行性疾病及损伤的在体研究。方法　构建穿梭质粒pDC3 16 huCT1和pDC3 16 eGFP

CsCl梯度离心制备高纯度的病毒基因组质粒pBHloxdeltaE1

3Cre、pHG14 0。培养2 93细胞

CaCl2 法质粒共转染 2 93细胞构建并筛选腺病毒AdCMV huCT1和AdCMV eGFP。病毒原液转染 2 93细胞及NIH3T3细胞

PCR、RT PCR及免疫组化鉴定。CsCl梯度离心纯化病毒

空斑试验检测病毒滴度。纯化病毒注入大鼠颈脊髓

RT PCR及免疫组化检验AdCMA huCT的在体表达。结果　采用双质粒共转染 2 93细胞Cre loxP位点同源重组方法构建了E1和E3缺失的含MCMV启动子、外源基因和SV40PloyA的AdCMV huCT1和AdCMV eGFP载体。经过PCR、RT PCR和免疫组化证实腺病毒载体构建成功。病毒经过CsCl梯度离心纯化后

AdCMV huCT1滴度达到 3 .0× 10 1 0 pfu。RT PCR及免疫组化显示AdCMV huCT1在大鼠脊髓中特异性表达。结论　构建并纯化了体外及体内高效表达的AdCMV huCT1。