目的　用糖皮质激素受体配体结合区 (GR LBD)片段构建酵母双杂合系统中的诱饵载体。方法　根据GenBankGR LBD序列设计引物

以人胎肝cDNA文库为模板

PCR扩增GR LBD片段

该片段与pGEM TVectorSystems连接

SmaⅠ SalⅠ双酶切鉴定。回收相应连接片段

与酵母表达载体pGBKT7连接

重组质粒命名为pGBKT7 GRLBD

送大连宝生物公司测序。用醋酸锂法转化酶母菌AH10 9

在选择性培养基上观察pGBKT7 GRLBD在AH10 9中的表达情况

酵母双杂交检测GR与已知阳性蛋白SRC 1的结合

鉴定转化酵母株表型及表达。结果　PCR扩增出的DNA片段约 893bp

大小正确

并成功连接到T 载体

释放出所需片段893bp。构建与Gal4 BD融合表达载体pGBKT7 GRLBD

测序结果表明序列完全正确

融合区域的读码框正确。pGBKT7 GRLBD转化感受态AH10 9

在SD Trp板上生长良好

AH10 9[pGBKT7 GRLBD]与Y187[pTD1 1]杂交后在SD Trp、 Leu、 Trp Leu板上生长而不能在 His Leu Trp、 Ade His Leu Trp板上生长

说明AH10 9[pGBKT7 GRLBD]转化成功但并未自主激活报告基因

酵母双杂交测定GRLBD与SRC 1有结合作用。结论　获得了在酵母细胞中正确表达且未自主激活报告基因的融合表达载体pGBKT7-GRLBD

可作为酵母双杂合系统中的“诱饵”。