目的　探讨细胞周期蛋白D1对肿瘤生物学行为的影响及用于基因治疗的可能。方法　利用重组技术将人细胞周期蛋白D1cDNA全片段克隆至亚克隆载体Bluescript KS中。利用该载体内的T2 /T3成对启动子体系

体外转录法制备正、反义细胞周期蛋白D1单链RNA探针。同时利用该载体转换酶切位点的作用

构建了人细胞周期蛋白D1反义RNA真核表达载体pDORD1AS

阳离子脂质体介导下转染胃癌细胞株

经G41 8筛选获得细胞周期蛋白D1反义RNA稳定表达的阳性细胞克隆。用免疫细胞化学、流式细胞仪、分子杂交、病理形态学和细胞生物学方法对该阳性细胞克隆进行检测

同时设未经转染和转染空载体胃癌细胞组作对照。结果　阳性细胞克隆细胞周期蛋白D1表达较对照组减少 (抑制率约为 3 6% ) ;细胞体积增大

核浆比例下降 ;细胞倍增时间延长 (4 2 .2h比 2 6.8h及 2 6.4h)

生长饱和密度下降 (1 .9× 1 0 5 比 4.8× 1 0 5 及 4.8× 1 0 5 )

G1/G0 期细胞比例增加 (80 .9%比 64 .6%及63 .8% )

血清依赖性有所恢复

裸鼠成瘤率下降 (0 / 4比 4/ 4及 4/ 4 )。结论　稳定表达细胞周期蛋白D1反义RNA对胃癌细胞SGC790 1 /VCR的恶性表型有一定的逆转作用

进一步深入的研究是有意义的。