基于Tet-on系统的DBN1诱导敲减模型的构建及其对肺癌细胞核形态稳态与衰老的调控作用

胡星; 李瑶; 张莲; 张春冬

doi:10.13406/j.cnki.cyxb.004092

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基于Tet-on系统的DBN1诱导敲减模型的构建及其对肺癌细胞核形态稳态与衰老的调控作用

基础研究 | 更新时间：2026-05-13

- 基于Tet-on系统的DBN1诱导敲减模型的构建及其对肺癌细胞核形态稳态与衰老的调控作用
- Establishment of a model of developmentally regulated brain protein 1 knockdown based on the Tet-on system and its regulatory effect on nuclear morphological homeostasis and senescence of lung cancer cells
- 重庆医科大学学报 2026年51卷第5期页码：645-653
- 作者机构：
  
  1.重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室，重庆 400016
  2.重庆医科大学组织学与胚胎学教研室，重庆 400016
- 作者简介：
  
  胡　星，Email：huxing1117@outlook.com，研究方向：细胞骨架/肺癌。
  张春冬，Email：zhangcd@cqmu.edu.cn。
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金青年科学基金资助项目(82403567)
- DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.004092
  中图分类号： R734.2
- 收稿：2026-01-16，
  
  修回：2026-03-19，
  
  录用：2026-03-20，
  
  纸质出版：2026-05-28
- 稿件说明：
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胡星，李瑶，张莲，等.基于Tet-on系统的DBN1诱导敲减模型的构建及其对肺癌细胞核形态稳态与衰老的调控作用[J].重庆医科大学学报，2026，51（5）：645-653.

Hu Xing,Li Yao,Zhang Lian,et al.Establishment of a model of developmentally regulated brain protein 1 knockdown based on the Tet-on system and its regulatory effect on nuclear morphological homeostasis and senescence of lung cancer cells[J].Journal of Chongqing Medical University,2026,51(5):645-653.
胡星，李瑶，张莲，等.基于Tet-on系统的DBN1诱导敲减模型的构建及其对肺癌细胞核形态稳态与衰老的调控作用[J].重庆医科大学学报，2026，51（5）：645-653. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.004092.

Hu Xing,Li Yao,Zhang Lian,et al.Establishment of a model of developmentally regulated brain protein 1 knockdown based on the Tet-on system and its regulatory effect on nuclear morphological homeostasis and senescence of lung cancer cells[J].Journal of Chongqing Medical University,2026,51(5):645-653. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.004092.

摘要

目的

利用Tet-on慢病毒诱导系统构建发展调节脑蛋白1（developmentally regulated brain protein 1，DBN1）（Drebrin）条件性敲减的肺癌A549细胞模型，探讨DBN1在肺癌恶性表型维持、细胞核形态稳态及细胞衰老中的作用。

方法

通过UALCAN和基因表达谱交互分析数据库（Gene Expression Profiling Interactive Analysis database，GEPIA）分析DBN1在肺癌中的表达特征及预后价值；构建pInducer10-shDBN1诱导表达系统，筛选并优化Doxy诱导条件；采用蛋白质印迹（Western blot）、克隆形成、划痕实验及β-半乳糖苷酶染色等方法，系统评估DBN1缺失对细胞增殖、迁移、衰老及细胞核形态的影响。

结果

患者预后不良与肺癌组织中DBN1的异常上调显著相关，临床数据显示该蛋白在癌组织中呈现高丰度表达（

0.050）。成功构建高效、可控的Tet-on诱导敲减模型（4 μg/mL Doxy诱导6 d为最佳条件）。功能实验表明，诱导敲减DBN1明显抑

制A549细胞的增殖与迁移（

0.010），并诱发明显的细胞衰老表型［衰老相关分泌表型因子（senescence-associated secretory phenotype factor，SASP）白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）等上调］。免疫荧光显示，DBN1缺失导致F-actin重构异常及核纤层蛋白Lamin A/C分布紊乱，引起细胞核形态扭曲。

结论

DBN1是肺癌进展的关键促癌因子；本研究通过诱导系统揭示DBN1在维持肺癌细胞核形态稳态及抑制衰老中的新功能，为肺癌靶向“诱导衰老”治疗提供潜在靶点。

Abstract

Objective

To establish a conditional knockdown model of developmentally regulated brain protein 1（DBN1，also known as Drebrin） in human lung cancer A549 cells using the inducible Tet‑on lentivirus system，and to investigate the role of DBN1 in maintaining malignant phenotype，preserving nuclear morphological homeostasis，and regulating cellular senescence in lung cancer.

Methods

UALCAN and Gene Expression Profiling Interactive Analysis database were used to analyze the expression characteristics and prognostic value of DBN1 in lung cancer. The pInducer10-shDBN1 inducible expression system was constructed，and doxycycline induction conditions were screened and optimized. Western blot，colony formation assay，wound healing assay，and β-galactosidase staining were used to assess the effect of DBN1 depletion on cell proliferation，migration，senescence，and nuclear morphology.

Results

The poor prognosis of patients was significantly associated with abnormal upregulation of DBN1 in lung cancer tissue，and clinical data showed that this protein was highly abundant in cancerous tissue（

0.05）. An efficient and controllable Tet‑on inducible knockdown model was successfully established，with the optimal condition of induction with 4 μg/mL doxycycline for 6 days. Functional experiments showed that inducible knockdown of DBN1 significantly inhibited the proliferation and migration of A549 cells（

0.01） and triggered a pronounced cellular senescence phenotype，accompanied by upregulation of the

senescence‑associated secretory phenotype factors such as interleukin‑6 and tumor necrosis factor. Immunofluorescence assay showed that DBN1 depletion resulted in abnormal F‑actin remodeling and disrupted distribution of the nuclear lamina proteins Lamin A/C，thereby leading to distorted nuclear morphology.

Conclusion

DBN1 is a key oncogenic factor that promotes the progression of lung cancer. By using an inducible knockdown system，this study reveals a novel role of DBN1 in maintaining nuclear morphological homeostasis and inhibiting cellular senescence in lung cancer and provides a potential therapeutic target for senescence-inducing treatment of lung cancer.

关键词

Keywords

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