浏览全部资源
扫码关注微信
DExH-box解旋酶9 O-GlcNAc修饰对HBV相关肝癌细胞增殖能力的影响
Effect of DExH-box helicase 9 O-GlcNAc modification on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells
- 重庆医科大学学报 2025年50卷第6期 页码：799-807
- 作者机构：
重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室，重庆 400016
- 作者简介：
罗慧敏，Email：luohuimin@stu.cqmu.edu.cn，研究方向：乙型肝炎病毒复制的基础研究。
黄爱龙，Email：ahuang@cqmu.edu.cn。
- 基金信息：国家自然科学基金资助项目(U20A20392;82102377)
DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.003824
中图分类号： R735.7收稿：2024-10-24，
修回：2025-01-03，
录用：2025-01-19，
纸质出版：2025-06-28
- 稿件说明：
移动端阅览
罗慧敏,皮雨博,陈彦猛,等.DExH-box解旋酶9 O-GlcNAc修饰对HBV相关肝癌细胞增殖能力的影响[J].重庆医科大学学报,2025,50(6):799-807.
Luo Huimin,Pi Yubo,Chen Yanmeng,et al.Effect of DExH-box helicase 9 O-GlcNAc modification on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(6):799-807.
罗慧敏,皮雨博,陈彦猛,等.DExH-box解旋酶9 O-GlcNAc修饰对HBV相关肝癌细胞增殖能力的影响[J].重庆医科大学学报,2025,50(6):799-807. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003824.
Luo Huimin,Pi Yubo,Chen Yanmeng,et al.Effect of DExH-box helicase 9 O-GlcNAc modification on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(6):799-807. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003824.
摘要
目的
2
研究DExH-box解旋酶9（DExH-box helicase 9，DHX9）的氧连接-N-乙酰葡萄糖胺（O-linked N-acetylglucosamine，O-GlcNAc）修饰对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）相关肝癌细胞增殖能力的影响。
方法
2
通过分子克隆构建pAdTrack-TO4-DHX9-3Flag重组腺病毒质粒，并将重组腺病毒质粒转染至HEK293细胞中，包装、扩增重组腺病毒AdDHX9。通过免疫共沉淀实验检测DHX9与O-GlcNAc转移酶（O-GlcNAc transferase，OGT）的相互作用，免疫荧光实验研究DHX9与OGT共定位情况。通过琥珀酰化小麦胚芽凝集素（succinylated wheat germ agglutinin，sWGA）和糖基化免疫沉淀实验（immunoprecipitation，IP）检测DHX9 O-GlcNAc修饰水平。通过克隆形成实验和细胞生长曲线探索DHX9 O-GlcNAc修饰对HBV相关肝癌细胞增殖能力的影响。
结果
2
成功获得了重组腺病毒AdDHX9，经Western blot鉴定了DHX9的表达。DHX9与OGT相互作用，2者共定位于细胞核。sWGA和糖基化IP实验证实了DHX9能够发生O-GlcNAc修饰，并且HBV感染促进了DHX9 O-GlcNAc修饰水平。克隆形成实验显示，与AdGFP对照组（142.667±7.572）相比，AdDHX9组（386.667±15.630）的细胞克隆数量增加（
P
<
0.001）。细胞生长曲线结果显示，AdDHX9组（22.860±0.770）比AdGFP对照组（13.670±0.517）的细胞整体生长速率增加（
P
<
0.001）。
结论
2
HBV感染促进DHX9 O-GlcNAc修饰；DHX9 O-GlcNAc修饰增强HBV相关肝癌细胞的增殖能力。
Abstract
Objective
2
To investigate the effect of DExH-box helicase 9（DHX9） O-linked N-acetylglucosamine（O-GlcNAc） modification（O-GlcNAcylation） on the proliferation of hepatitis B virus（HBV）-associated hepatoma cells.
Methods
2
The pAdTrack-TO4-DHX9-3Flag recombinant adenovirus plasmid was constructed by molecular cloning and transfected into HEK293 cells for packaging and amplification of the recombinant adenovirus AdDHX9. The interaction between DHX9 and O-GlcNAc transferase（OGT） was confirmed using co-immunoprecipitation. The co-localization between DHX9 and OGT was measured by immunofluorescence. The level of DHX9 O-GlcNAcylation was determined using succinylated wheat germ agglutinin（sWGA） and glycosylated immunoprecipitation （IP）. The effect of DHX9 O-GlcNAcylation on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells was assessed using the colony-forming assay and cell growth curves.
Results
2
The recombinant adenovirus AdDHX9 was successfully obtained，and DHX9 expression was confirmed by Western blot. DHX9 interacted with OGT，and the two proteins were co-localized on the nucleus. The sWGA and glycosylated IP experiments showed that DHX9 underwent O-GlcNAcylation，which was further enhanced by HBV infection. The colony-forming assay demonstrated that the number of cell clones was increased in the AdDHX9 group（386.667±15.630） compared with the AdGFP control group（142.667±7.572，
P
<
0.001）. Mo
reover，cell growth curves demonstrated that the overall cell growth rate was enhanced in the AdDHX9 group（22.860±0.770） compared with the AdGFP control group（13.670±0.517，
P
<
0.001）.
Conclusion
2
HBV infection promotes DHX9 O-GlcNAcylation，which enhances the proliferation of HBV-associated hepatoma cells.
关键词
Keywords
references
Sung H ， Ferlay J ， Siegel RL ， et al . Global cancer statistics 2020：GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries [J ] . CA Cancer J Clin ， 2021 ， 71 （ 3 ）： 209 - 249 ．
黄 罡 ， 谢 青 ， 贺 佳 ， 等 . 乙型肝炎病毒相关肝细胞癌抗病毒治疗中国专家共识（2023年版） [J ] . 肝脏 ， 2023 ， 28 （ 1 ）： 1 - 10 .
Huang G ， Xie Q ， He J ， et al . Chinese expert consensus on antiviral therapy for hepatitis B virus-associated hepatocellular carcinoma（2023 edition） [J ] . Chin Hepatol ， 2023 ， 28 （ 1 ）： 1 - 10 .
Xue X ， Liao W ， Xing Y . Comparison of clinical features and outcomes between HBV-related and non-B non-C hepatocellular carcinoma [J ] . Infect Agent Cancer ， 2020 ， 15 ： 11 ．
Du DY ， Liu C ， Qin MY ， et al . Metabolic dysregulation and emerging therapeutical targets for hepatocellular carcinoma [J ] . Acta Pharm Sin B ， 2022 ， 12 （ 2 ）： 558 - 580 ．
Zhu Y ， Zhao Y ， Ning Z ， et al . Metabolic self-feeding in HBV-associated hepatocarcinoma centered on feedback between circulation lipids and the cellular MAPK/mTOR axis [J ] . Cell Commun Signal ， 2024 ， 22 （ 1 ）： 280 ．
Yang Y ， Yan Y ， Yin JX ， et al . O-GlcNAcylation of YTHDF2 promotes HBV-related hepatocellular carcinoma progression in an N6-methyladenosine-dependent manner [J ] . Signal Transduct Target Ther ， 2023 ， 8 ： 63 ．
Paneque A ， Fortus H ， Zheng J ， et al . The hexosamine biosynthesis pathway：regulation and function [J ] . Genes（Basel） ， 2023 ， 14 （ 4 ）： 933 ．
Zhang J ， Xun M ， Li CJ ， et al . The O-GlcNAcylation and its promotion to hepatocellular carcinoma [J ] . Biochim Biophys Acta BBA Rev Cancer ， 2022 ， 1877 （ 6 ）： 188806 ．
Zhou P ， Chang WY ， Gong DA ， et al . O-GlcNAcylation of SPOP promotes carcinogenesis in hepatocellular carcinoma [J ] . Oncogene ， 2023 ， 42 ： 725 - 736 .
彭佳欣 ， 张自辉 ， 刘婧纯 ， 等 . O-GlcNAc糖基化修饰在恶性肿瘤中作用的研究进展 [J ] . 山东医药 ， 2024 ， 64 （ 13 ）： 98 - 102 .
Peng JX ， Zhang ZH ， Liu JC ， et al . Research progress of O-GlcNAc glycosylation modification in malignant tumors [J ] . Shandong Med J ， 2024 ， 64 （ 13 ）： 98 - 102 .
Lee CG ， Eki T ， Okumura K ， et al . The human RNA helicase A （DDX9） gene maps to the prostate cancer susceptibility locus at chromosome band 1q25 and its pseudogene（DDX9P） to 13q22，respectively [J ] . Somat Cell Mol Genet ， 1999 ， 25 （ 1 ）： 33 - 39 ．
Zhang S ， Grosse F . Domain structure of human nuclear DNA helicase Ⅱ（RNA helicase A） [J ] . J Biol Chem ， 1997 ， 272 （ 17 ）： 11487 - 11494 ．
Gulliver C ， Hoffmann R ， Baillie GS . The enigmatic helicase DHX9 and its association with the hallmarks of cancer [J ] . Future Sci OA ， 2020 ， 7 （ 2 ）： FSO650 ．
吴源兵 ， 吴新强 ， 何良梅 ， 等 . DHX9：恶性肿瘤治疗的新靶点 [J ] . 赣南医学院学报 ， 2017 ， 37 （ 4 ）： 620 - 625 .
Wu YB ， Wu XQ ， He LM ， et al . DHX9：a new therapeutic target on the treatment of cancer [J ] . J Gannan Med Univ ， 2017 ， 37 （ 4 ）： 620 - 625 .
Shi F ， Cao S ， Zhu Y ， et al . High expression of DHX9 promotes the growth and metastasis of hepatocellular carcinoma [J ] . J Clin Lab Anal ， 2021 ， 35 （ 12 ）： e24052 ．
Wu KJ ， Zhang YQ ， Liu YX ， et al . Phosphorylation of UHRF2 affects malignant phenotypes of HCC and HBV replication by blocking DHX9 ubiquitylation [J ] . Cell Death Discov ， 2023 ， 9 ： 27 ．
Shen B ， Chen Y ， Hu J ， et al . Hepatitis B virus X protein modulates upregulation of DHX9 to promote viral DNA replication [J ] . Cell Microbiol ， 2020 ， 22 （ 3 ）： e13148 ．
Hu J ， Gao Q ， Yang Y ， et al . Hexosamine biosynthetic pathway promotes the antiviral activity of SAMHD1 by enhancing O-GlcNAc transferase-mediated protein O-GlcNAcylation [J ] . Theranostics ， 2021 ， 11 （ 2 ）： 805 - 823 ．
Zinchuk V ， Wu Y ， Grossenbacher-Zinchuk O . Bridging the gap between qualitative and quantitative colocalization results in fluorescence microscopy studies [J ] . Sci Rep ， 2013 ， 3 ： 1365 ．
Sun Y ， Zhang H ， Ma RR ， et al . ETS-1-activated LINC01016 over-expression promotes tumor progression via suppression of RFFL-mediated DHX9 ubiquitination degradation in breast cancers [J ] . Cell Death Dis ， 2023 ， 14 ： 507 ．
Shan YN ， Wei SS ， Xiang XH ， et al . SNORA42 promotes oesophageal squamous cell carcinoma development through triggering the DHX9/p65 axis [J ] . Genomics ， 2021 ， 113 （ 5 ）： 3015 - 3029 ．
Yang BZ ， Liu MY ， Chiu KL ， et al . DHX9 SUMOylation is required for the suppression of R-loop-associated genome instability [J ] . Nat Commun ， 2024 ， 15 ： 6009 ．
Liu MY ， Lin KR ， Chien YL ， et al . ATR phosphorylates DHX9 at serine 321 to suppress R-loop accumulation upon genotoxic stress [J ] . Nucleic Acids Res ， 2024 ， 52 （ 1 ）： 204 - 222 ．
Shi CY ， Wang Y ， Wu MJ ， et al . Promoting anti-tumor immunity by targeting TMUB1 to modulate PD-L1 polyubiquitination and glycosylation [J ] . Nat Commun ， 2022 ， 13 ： 6951 ．
Liu T ， Li Y ， Gu H ， et al . p21-Activated kinase 6（PAK6） inhibits prostate cancer growth via phosphorylation of androgen receptor and tumorigenic E3 ligase murine double minute-2（Mdm2） [J ] . J Biol Chem ， 2013 ， 288 （ 5 ）： 3359 - 3369 ．
Liu SL ， He LM ， Wu JH ， et al . DHX9 contributes to the malignant phenotypes of colorectal cancer via activating NF-κB signaling pathway [J ] . Cell Mol Life Sci ， 2021 ， 78 （ 24 ）： 8261 - 8281 ．
Yan X ， Chang J ， Sun R ， et al . DHX9 inhibits epithelial-mesenchymal transition in human lung adenocarcinoma cells by regulating STAT3 [J ] . Am J Transl Res ， 2019 ， 11 （ 8 ）： 4881 - 4894 ．
Wang WP ， Sun Y ， Lu Q ， et al . Gankyrin promotes epithelial-mesenchymal transition and metastasis in NSCLC through forming a closed circle with IL-6/STAT3 and TGF-β/SMAD3 signaling pathway [J ] . Oncotarget ， 2017 ， 8 （ 4 ）： 5909 - 5923 ．
Zhu G ， Luo L ， He Y ， et al . AURKB targets DHX9 to promote hepatocellular carcinoma progression via PI3K/AKT/mTOR pathway [J ] . Mol Carcinog ， 2024 ， 63 （ 9 ）： 1814 - 1826 ．
Yu J ， Xu QG ， Wang ZG ， et al . Circular RNA cSMARCA5 inhibits growth and metastasis in hepatocellular carcinoma [J ] . J Hepatol ， 2018 ， 68 （ 6 ）： 1214 - 1227 ．
Mustafa M ， Ahmad R ， Tantry IQ ， et al . Apoptosis：a comprehensive overview of signaling pathways，morphological changes，and physiological significance and therapeutic implications [J ] . Cells ， 2024 ， 13 （ 22 ）： 1838 ．
Allison DF ， Wang GG . R-loops：formation，function，and relevance to cell stress [J ] . Cell Stress ， 2019 ， 3 （ 2 ）： 38 - 46 ．
Cristini A ， Groh M ， Kristiansen MS ， et al . RNA/DNA hybrid interactome identifies DXH9 as a molecular player in transcriptional termination and R-loop-associated DNA damage [J ] . Cell Rep ， 2018 ， 23 （ 6 ）： 1891 - 1905 ．
Yuan W ， Al-Hadid Q ， Wang ZH ， et al . TDRD3 promotes DHX9 chromatin recruitment and R-loop resolution [J ] . Nucleic Acids Res ， 2021 ， 49 （ 15 ）： 8573 - 8591 ．
Xiang J ， Chen C ， Liu R ， et al . Gluconeogenic enzyme PCK1 deficiency promotes CHK2 O-GlcNAcylation and hepatocellular carcinoma growth upon glucose deprivation [J ] . J Clin Invest ， 2021 ， 131 （ 8 ）： 144703 .
Feng ZQ ， Yin JX ， Zhang ZR ， et al . O-GlcNAcylation of E3 ubiquitin ligase SKP2 promotes hepatocellular carcinoma proliferation [J ] . Oncogene ， 2024 ， 43 ： 1149 - 1159 ．
0
浏览量
10
下载量
0
CSCD
- 网络PDF下载
- WORD下载
- Meta-XML下载
- BibTeX下载
- Endnote下载
- RefMan 下载
- NoteExpress下载
- NoteFirst下载
关联资源
相关文章
相关作者
相关机构
- 技术支持由北京北大方正电子有限公司提供 京ICP备09064830号-19
京公网安备11010802024621 - 本系统建议在Chrome、 IE9+ 以上版本浏览器阅读本站内容，360浏览器请切换至极速模式
- Cookies帮助我们提供服务并提供个性化体验。使用本网站，即表示您同意我们使用Cookies
