利用CRISPR-Cas9技术探究肠道ERβ对肠源性TPH1和5-HT水平的影响

呼文强; 杨千嬉; 贺桂琼; 骆世芳

doi:10.13406/j.cnki.cyxb.003636

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利用CRISPR-Cas9技术探究肠道ERβ对肠源性TPH1和5-HT水平的影响

基础研究 | 更新时间：2025-10-23

- 利用CRISPR-Cas9技术探究肠道ERβ对肠源性TPH1和5-HT水平的影响
- Exploring the effect of intestinal ERβ on enterogenic TPH1 and 5-HT levels using CRISPR-Cas9 technology
- 重庆医科大学学报 2025年50卷第1期页码：37-43
- 作者机构：
  
  1.重庆医科大学神经科学研究中心，重庆 400016
  2.重庆医科大学基础医学院人体解剖学教研室，重庆 400016
- 作者简介：
  
  呼文强，Email：2021110050@stu.cqmu.edu.cn，研究方向：肠道雌激素受体与阿尔茨海默病的关联性。
  骆世芳，Email：100425@cqmu.edu.cn。
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金资助项目(82371203);重庆市基础与前沿研究计划资助项目(CSTB2023NSCQ-MSX0161)
- DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.003636
  中图分类号： R361
- 收稿：2024-03-07，
  
  修回：2024-07-15，
  
  录用：2024-08-05，
  
  纸质出版：2025-01-28
- 稿件说明：
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呼文强,杨千嬉,贺桂琼,等.利用CRISPR-Cas9技术探究肠道ERβ对肠源性TPH1和5-HT水平的影响[J].重庆医科大学学报,2025,50(1):37-43.

Hu Wenqiang,Yang Qianxi,He Guiqiong,et al.Exploring the effect of intestinal ERβ on enterogenic TPH1 and 5-HT levels using CRISPR-Cas9 technology[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(1):37-43.
呼文强,杨千嬉,贺桂琼,等.利用CRISPR-Cas9技术探究肠道ERβ对肠源性TPH1和5-HT水平的影响[J].重庆医科大学学报,2025,50(1):37-43. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003636.

Hu Wenqiang,Yang Qianxi,He Guiqiong,et al.Exploring the effect of intestinal ERβ on enterogenic TPH1 and 5-HT levels using CRISPR-Cas9 technology[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(1):37-43. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003636.

摘要

目的

探索C57BL/6J小鼠结肠上皮雌激素受体β（estrogen receptor β，ERβ）缺失对结肠色氨酸羟化酶-1（TPH1，tryptophan hydroxylase-1）和5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）水平的影响。

方法

利用CRISPR-Cas9技术获得Pvillin-Cre

+/-

小鼠、ERβflox

+/-

小鼠，通过配种繁殖最终获得肠道ERβ敲除纯合子组（ERβflox

-/-

-Pvillin-Cre

+/+

，ERβCKO，

=5）、杂合子组（ERβflox

+/-

-Pvillin-Cre

+/+

，ERβCKO

+/-

）（

=5）及同窝野生型（wild type，WT）小鼠。取6个月龄和12个月龄的各品系小鼠作为研究对象。结合苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE）、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）、免疫印迹（Western blot，WB）和免疫组化（immunohistochemistry，IHC）方法对各组小鼠肠道形态、肠道ERβ、5-HT和TPH1水平进行检测。

结果

基因鉴定验证肠道ERβCKO小鼠成功构建后，WB显示肠道ERβ水平明显下调（

0.05）。HE显示肠道ERβ敲除后，肠道结构完整性与肠道黏膜上皮的绒毛发育均异常。ELISA结果显示，2个月龄段ERβCKO小鼠肠道5-HT水平较WT组小鼠下降明显（

0.05），且呈月龄依赖方式。IHC结果显示，各组小鼠肠道均出现TPH1免疫阳性表达，与WT小鼠相比，ERβCKO小鼠肠道TPH1免疫阳性细胞数量减少（

0.05），免疫阳性物表达量更低（

0.05），但TPH1未呈现月龄依赖方式。

结论

结肠ERβ下调可引起结肠TPH1蛋白和5-HT水平含量降低，继而引发小鼠肠道功能异常，增加患肠道疾病的风险，这为以ERβ为靶点的肠道相关疾病的发病机制提供了实验室依据。

Abstract

Objective

To investigate the effects of colonic epithelial estrogen receptor β（ERβ） deletion on colonic tryptophan hydroxylase-1（TPH1） and 5-hydroxytryptamine（5-HT） levels in C57BL/6J mice.

Methods

Pvillin-Cre

+/-

mice and ERβflox

+/-

mice were obtained using CRISPR-Cas9 technology，and intestinal ERβ knockout homozygous（ERβflox

-/-

-Pvillin-Cre

+/+

，ERβCKO，

=5），heterozygous（ERβflox

+/-

-Pvillin-Cre

+/+

，ERβCKO

+/-

=5），and littermate wild-type（WT） mice were ultimately obtained by mating and breeding. Mice of each strain at 6 and 12 months of age were used for the study. Hematoxylin-eosin staining（HE），enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA），Western blotting（WB），and immunohistochemistry（IHC） were used for determining the intestinal morphology and measuring intestinal ERβ，5-HT，and TPH1 levels of mice in each group.

Results

After the successful construction of intestinal ERβCKO mice as verified by gene identification，WB showed that intestinal ERβ levels were significantly down-regulated（

0.05）. HE showed abnormalities in intestinal structural integrity and intestinal mucosal epithelial villi development after intestinal ERβ knockdown. ELISA results showed that intestinal 5-HT levels of ERβCKO mice at 6 and 12 months of age were significantly decreased compared with those of WT mice（

0.05），and the decrease was in a month-a

ge-dependent manner. IHC results showed that TPH1 was expressed in the intestines of mice of all groups. However，ERβCKO mice showed a reduced number of TPH1 immunoreactive cells（

0.05） and lower expression of immunoreactive substances（

0.05） compared with WT mice，but the decline in TPH1 was not in a month-age-dependent manner.

Conclusion

Down-regulation of colonic ERβ induces a decrease in colonic TPH1 protein and 5-HT levels，which subsequently triggers abnormal intestinal function and increases the risk of developing intestinal diseases in mice. This study is expected to provide a laboratory basis for the pathogenesis of ERβ-targeted intestinal diseases.

关键词

Keywords

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