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METTL3介导的m6A修饰在结直肠癌奥沙利铂耐药中的作用研究
Role of N6-methyladenosine mediated by methyltransferase-like 3 in oxaliplatin resistance of colorectal cancer
- 重庆医科大学学报 2022年47卷第8期 页码：941-947
- 作者机构：
山东大学第二医院检验医学中心、山东省肿瘤标志物检测工程实验室，济南 250033
- 作者简介：
张世慧，Email：zhangshzsh@163.com， 研究方向：肿瘤新型标志物的发现与应用。
王传新，Email：cxwang@sdu.edu.cn。
- 基金信息：山东省自然科学基金资助项目(ZR2020QH197)
DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.003077
中图分类号： R735.3收稿：2022-06-01，
纸质出版：2022-08-28
- 稿件说明：
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张世慧,齐秋晨,李培龙,等.METTL3介导的m6A修饰在结直肠癌奥沙利铂耐药中的作用研究[J].重庆医科大学学报,2022,47(8):941-947.
Zhang Shihui,Qi Qiuchen,Li Peilong,et al.Role of N6-methyladenosine mediated by methyltransferase-like 3 in oxaliplatin resistance of colorectal cancer[J].Journal of Chongqing Medical University,2022,47(8):941-947.
张世慧,齐秋晨,李培龙,等.METTL3介导的m6A修饰在结直肠癌奥沙利铂耐药中的作用研究[J].重庆医科大学学报,2022,47(8):941-947. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003077.
Zhang Shihui,Qi Qiuchen,Li Peilong,et al.Role of N6-methyladenosine mediated by methyltransferase-like 3 in oxaliplatin resistance of colorectal cancer[J].Journal of Chongqing Medical University,2022,47(8):941-947. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003077.
摘要
目的
2
探究N
6
-甲基腺嘌呤（N
6
-methyladenosine，m
6
A）调控因子甲基转移酶样蛋白3（methyltransferase-like 3，METTL3）在结直肠癌奥沙利铂（oxaliplatin，OXA）耐药中的作用。
方法
2
采用浓度梯度法构建OXA耐药细胞株HCT116/OXA，CCK-8分析其耐药性；采用Dot blot及m
6
A RNA甲基化定量ELISA实验检测细胞RNA m
6
A水平，RNA-seq及qRT-PCR筛选差异m
6
A调控因子，Western blot验证METTL3表达水平；利用腺病毒感染技术在HCT116细胞过表达METTL3，CCK-8检测各组细胞的增殖活性；通过对GEO数据库中HCT116细胞敲除METTL3的MeRIP-seq和RNA-seq数据与耐药细胞RNA-seq联合分析，筛选耐药相关的METTL3介导m
6
A修饰调控的下游靶基因及信号通路；TCGA数据库分析METTL3与患者预后的相关性。
结果
2
HCT116/OXA细胞对OXA的耐药性明显高于其亲代细胞（
P<
0.01）；与HCT116相比，耐药细胞的RNA m
6
A水平异常上调（
P
<
0.01），且伴随METTL3的mRNA和蛋白水平升高；过表达METTL3明显增强HCT116细胞对OXA的耐药性（
P
<
0.01）；多组学数据联合分析筛选的METTL3介导m
6
A修饰调控的与耐药相关的关键基因主要富集在ABC转运蛋白、干细胞多能性调节信号通路、TGF-β信号通路等；METTL3高表达与结直肠癌患者的不良预后明显相关（
P
<
0.01）。
结论
2
METTL3介导的m
6
A修饰可能通过调节ABC转运蛋白、调节干细胞多能性的信号通路、TGF-β信号通路等经典耐药信号通路促进结直肠癌OXA耐药。
Abstract
Objective
2
To investigate the role of N
6
-methyladenosine （m
6
A） mediated by methyltransferase-like 3（METTL3） in oxaliplatin（OXA） resistance of colorectal cancer.
Methods
2
Concentration gradient induction method was used to establish OXA resistant cell line HCT116/OXA，and CCK-8 was used to detect the drug resistance of cells. Dot blot and ELISA were used to analyze the expression level of m
6
A in HCT116/OXA and parental cells. RNA-seq and qRT-PCR were used to screen the differential regulators of m
6
A. Western blot was used to detect the expression level of METTL3. METTL3 was overexpressed in HCT116 by adenovirus infection technique，and the proliferation activity of each group was detected by CCK-8. The key genes and signal pathways of m
6
A modification and regulation mediated by METTL3 related to drug resistance were screened through the combined analysis of MeRIP-seq and RNA-seq data of METTL3 knocked out by HCT116 cells in GEO database and RNA-seq data of drug-resistant cells. The correlation between METTL3 and prognosis was analyzed by TCGA database.
Results
2
The resistance of HCT116/OXA cells to OXA was significantly higher than that of their parents（
P
<
0.01）. Compared with HCT116 cells，the level of RNA m6A modification in HCT116/OXA cells was significantly up-regulated（
P
<
0.01） and the expression of METTL3 was significantly increased. Overexpression of METTL3 significantly enhanced the resistance of HCT116 cells to OXA（
P
<
0.01）. Differential genes selected from multiomics data conjoint analysis，related to drug resistance and regulated by METTL3-mediated m6A modification had significant correlation to ABC transporters，stem cell pluripote
ncy，TGF-β signaling pathway and other signaling pathways. The high expression of METTL3 was significantly correlated with the poor prognosis of colorectal cancer patients（
P
<
0.01）.
Conclusion
2
METTL3 mediated m
6
A methylation modification may promote the OXA resistance of colorectal cancer by regulating ABC transporter，stem cell pluripotency and TGF-β signaling pathway and other classical drug resistance signaling pathways.
关键词
Keywords
references
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