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一种用于脓毒症快速检测的多重PCR检测体系构建
Establishment of a multiplex PCR system for rapid detection of sepsis
- 重庆医科大学学报 2022年47卷第8期 页码：982-988
- 作者机构：
1.重庆大学医学院，重庆 404100
2.重庆大学附属中心医院/重庆市急救医疗中心检验科及重症医学科，重庆 404100
3.北京迈基诺基因科技股份有限公司，北京 101318
- 作者简介：
胡谢飞，Email：766232328@qq.com， 研究方向：脓毒症检测相关研究。
李 维，Email：liwei0111@163.com。
- 基金信息：重庆市科技局面上资助项目(cstc2019jscx-msxmX0164);重庆市中青年医学高端人才工作室资助项目(ZQNYXGDRCGZS2019008)
DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.003072
中图分类号： R446.9收稿：2022-06-10，
纸质出版：2022-08-28
- 稿件说明：
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胡谢飞,邬文燕,智深深,等.一种用于脓毒症快速检测的多重PCR检测体系构建[J].重庆医科大学学报,2022,47(8):982-988.
Hu Xiefei,Wu Wenyan,Zhi Shenshen,et al.Establishment of a multiplex PCR system for rapid detection of sepsis[J].Journal of Chongqing Medical University,2022,47(8):982-988.
胡谢飞,邬文燕,智深深,等.一种用于脓毒症快速检测的多重PCR检测体系构建[J].重庆医科大学学报,2022,47(8):982-988. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003072.
Hu Xiefei,Wu Wenyan,Zhi Shenshen,et al.Establishment of a multiplex PCR system for rapid detection of sepsis[J].Journal of Chongqing Medical University,2022,47(8):982-988. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003072.
摘要
目的
2
建立一种基于多重实时荧光定量聚合酶链反应（multiple real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，多重PCR）技术的检测体系，快速、特异检测脓毒症患者血液中的病原菌。
方法
2
分析血液标本分离菌主要菌种分布，绘制脓毒症特异性病原微生物谱。同时根据保守区序列设计特异性引物，构建多重PCR检测反应体系。收集脓毒症患者静脉全血样本79例，健康体检者样本（阴性样本）40例，用所建立的检测体系进行鉴定，并与血培养方法比较。
结果
2
多重PCR法缩短检出时间至3 h，是血培养法的1/16。多重PCR法对目标病原菌样本符合率为88%（22/25），阴性样本符合率为100%（20/20），总符合率为94%，2种方法对目标病原菌的检出差异无统计学意义（
P
=0.250），且一致性良好（Kappa=0.867，
P
<
0.05）。多重PCR法与血培养法对临床诊断脓毒症样本的检出率分别为23.0%（17/74）及14.9%（11/74），2种方法间检出率差异有统计学意义（
P
=0.031）。
结论
2
与经典的“金标准”血培养法相比，本项目构建的多重PCR法检测时间短、符合率好、检出率更高，可为脓毒症患者更早诊断和治疗提供可靠依据。
Abstract
Objective
2
To establish a detection system based on multiple real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction（multiplex PCR）technique to rapidly and specifically detect pathogens in the blood of sepsis patients.
Methods
2
The main strains of pathogens isolated from blood samples were analyzed，and the spectrum of pathogens specific to sepsis was drawn. Specific primers were designed according to the sequences of the conserved regions to construct a multiplex PCR detection reaction system. Blood samples of 79 sepsis patients were collected，and 40 health subjects were included as negative and health controls during the same period. Then they were identified by the established detection system，and the blood culture method was compared.
Results
2
The detection time was shortened to 3 hours by multiplex PCR，which was 1/16 of blood culture. Compared with blood culture，the coincidence rate of multiplex PCR for target pathogen samples was 88%（22/25），the coincidence rate of negative samples was 100%（20/20），and the total coincidence rate was 94%. There was no significant difference between the two methods in the detection of target pathogens（
P
=0.250）with good consistency（Kappa=0.867，
P
<
0.05）. The detection rates of multiple PCR method and blood culture method for clinically diagnosed sepsis samples were 23.0%（17/74）and 14.9%（11/74），respectively. The detection rates of the two methods were statistically significant（
P
=0.031）.
Conclusion
2
Multiplex PCR method can provide a reliable basis for earlier diagnosis and treatment to sepsis patients. Compared with “gold standard” blood culture method，the multiplex PCR detection system constructed in the project has shorter detection time，better coincidence rate and higher detection rate，which can provide reliable evidence for the early diagnosis and treatment of sepsis patients.
关键词
Keywords
references
Cecconi M ， Evans L ， Levy M ， et al . Sepsis and septic shock [J ] . Lancet ， 2018 ， 392 （ 10141 ）： 75 - 87 .
Prescott HC ， Angus DC . Enhancing recovery from sepsis：a review [J ] . JAMA ， 2018 ， 319 （ 1 ）： 62 - 75 .
Fleischmann C ， Scherag A ， Adhikari NKJ ， et al . Assessment of global incidence and mortality of hospital-treated sepsis. Current estimates and limitations [J ] . Am J Respir Crit Care Med ， 2016 ， 193 （ 3 ）： 259 - 272 .
郭 鹰 ， 江代红 ， 郭富饶 . 血流感染的实验室诊断技术进展 [J ] . 实用医学杂志 ， 2021 ， 37 （ 17 ）： 2300 - 2303 .
Guo Y ， Jiang DH ， Guo FR . Progress in laboratory diagnostic technology of bloodstream infection [J ] . J Pract Med ， 2021 ， 37 （ 17 ）： 2300 - 2303 .
Groep K ， Bos MP ， Savelkoul PHM ， et al . Development and first evaluation of a novel multiplex real-time PCR on whole blood samples for rapid pathogen identification in critically ill patients with sepsis [J ] . Eur J Clin Microbiol Infect Dis ， 2018 ， 37 （ 7 ）： 1333 - 1344 .
Philip N ， Affendy NB ， Masri SN ， et al . Combined PCR and MAT improves the early diagnosis of the biphasic illness leptospirosis [J ] . PLoS One ， 2020 ， 15 （ 9 ）： e0239069 .
Long Y ， Zhang YX ， Gong YP ， et al . Diagnosis of sepsis with cell-free DNA by next-generation sequencing technology in ICU patients [J ] . Arch Med Res ， 2016 ， 47 （ 5 ）： 365 - 371 .
孟凡超 . 全自动血培养仪阳性结果分析及应用 [J ] . 中国医疗器械信息 ， 2021 ， 27 （ 14 ）： 73 - 74 .
Meng FC . Analysis and application of positive results of automatic blood culture instrument [J ] . China Med Device Inf ， 2021 ， 27 （ 14 ）： 73 - 74 .
Papafilippou L ， Claxton A ， Dark P ， et al . Nanotools for sepsis diagnosis and treatment [J ] . Adv Healthc Mater ， 2021 ， 10 （ 1 ）： e2001378 .
Huang HS ， Tsai CL ， Chang J ， et al . Multiplex PCR system for the rapid diagnosis of respiratory virus infection：systematic review and Meta-analysis [J ] . Clin Microbiol Infect ， 2018 ， 24 （ 10 ）： 1055 - 1063 .
Ye J ， Coulouris G ， Zaretskaya I ， et al . Primer-BLAST：a tool to design target-specific primers for polymerase chain reaction [J ] . BMC Bioinformatics ， 2012 ， 13 ： 134 .
Etchebarne BE ， Li ZG ， Stedtfeld RD ， et al . Evaluation of nucleic acid isothermal amplification methods for human clinical microbial infection detection [J ] . Front Microbiol ， 2017 ， 8 ： 2211 .
王 晶 ， 马 娟 ， 范 云 ， 等 . 2015—2017年陕西省人民医院临床血流感染病原菌的分布及耐药性分析 [J ] . 现代检验医学杂志 ， 2019 ， 34 （ 4 ）： 87 - 90，95 .
Wang J ， Ma J ， Fan Y ， et al . Distribution and drug resistance of pathogenic bacteria of blood culture in Shaanxi Provincial People's Hospital form 2015 to 2017 [J ] . J Mod Lab Med ， 2019 ， 34 （ 4 ）： 87 - 90，95 .
Vincent JL ， Moreno R ， Takala J ， et al . The SOFA（sepsis-related organ failure assessment）score to describe organ dysfunction/failure. On behalf of the Working Group on Sepsis-Related Problems of the European Society of Intensive Care Medicine [J ] . Intensive Care Med ， 1996 ， 22 （ 7 ）： 707 - 710 .
Reinhart K ， Daniels R ， Kissoon N ， et al . Recognizing sepsis as a global health priority：a WHO resolution [J ] . N Engl J Med ， 2017 ， 377 （ 5 ）： 414 - 417 .
Singer M ， Deutschman CS ， Seymour CW ， et al . The third international consensus definitions for sepsis and septic shock（ Sepsis -3） [J ] . JAMA ， 2016 ， 315 （ 8 ）： 801 - 810 .
熊晓玫 . 血培养阳性标本病原菌构成及其与PCT的相关性分析 [J ] . 基层医学论坛 ， 2019 ， 23 （ 22 ）： 3196 - 3198 .
Xiong XM . The correlation analysis of composition of pathogenic bacteria in positive samples of blood culture and its correlation with PCT [J ] . Med Forum ， 2019 ， 23 （ 22 ）： 3196 - 3198 .
McCarty TP ， White CM ， Pappas PG . Candidemia and invasive candidiasis [J ] . Infect Dis Clin North Am ， 2021 ， 35 （ 2 ）： 389 - 413 .
Gu W ， Deng XD ， Lee M ， et al . Rapid pathogen detection by metagenomic next-generation sequencing of infected body fluids [J ] . Nat Med ， 2021 ， 27 （ 1 ）： 115 - 124 .
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