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lncRNA NEAT1调控骨关节炎软骨细胞焦亡的机制
Mechanism of lncRNA NEAT1 regulating chondrocyte pyroptosis in osteoarthritis
- 局解手术学杂志 2025年34卷第3期 页码：199-204
- 作者机构：
海南医科大学第二附属医院关节外科，海南 海口 570311
- 作者简介：
李超艺，E-mail：li35499015@126.com
- 基金信息：海南省卫生健康行业科研项目(22A200068)
DOI：10.11659/jjssx.03E024082
中图分类号： R684.3收稿日期：2024-03-15，
纸质出版日期：2025-03-25
- 稿件说明：
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唐捷,张丕军,林维等.lncRNA NEAT1调控骨关节炎软骨细胞焦亡的机制[J].局解手术学杂志,2025,34(03):199-204.
TANG Jie,ZHANG Pi-jun,LIN Wei,et al.Mechanism of lncRNA NEAT1 regulating chondrocyte pyroptosis in osteoarthritis[J].JOURNAL OF REGIONAL ANATOMY AND OPERATIVE SURGERY,2025,34(03):199-204.
唐捷,张丕军,林维等.lncRNA NEAT1调控骨关节炎软骨细胞焦亡的机制[J].局解手术学杂志,2025,34(03):199-204. DOI： 10.11659/jjssx.03E024082.
TANG Jie,ZHANG Pi-jun,LIN Wei,et al.Mechanism of lncRNA NEAT1 regulating chondrocyte pyroptosis in osteoarthritis[J].JOURNAL OF REGIONAL ANATOMY AND OPERATIVE SURGERY,2025,34(03):199-204. DOI： 10.11659/jjssx.03E024082.
摘要
目的
2
探讨长链非编码RNA（lncRNA）核富集丰富转录本1（NEAT1）对骨关节炎（OA）软骨细胞焦亡信号轴的影响和潜在机制。
方法
2
收集6例OA患者的膝关节软骨组织和6例正常软骨组织。使用TargetScan 7.2和StarBase预测miR-26a与lncRNA NEAT1的靶向关系，双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1与miR-26a的靶向调控作用。将培养的软骨细胞系分为对照组（不进行药物干预）、IL-1β组（添加10 μg/L IL-1β诱导体外OA）、IL-1β+NEAT1-EV组（添加10 μg/L IL-1β，联合转染20 μg/L的NEAT1-EV）、IL-1β+NEAT1-OE组（添加10 μg/L IL-1β，联合转染20 μg/L的NEAT1-OE）、IL-1β+NEAT1-OE+mimic-NC组（添加10 μg/L IL-1β，联合转染20 μg/L的NEAT1-OE和50 μg/L的mimic-NC）、IL-1β+NEAT1-OE+mimic组（添加10 μg/L IL-1β，联合转染20 μg/L的NEAT1-OE和50 μg/L的miR-26a mimic）。qRT-PCR法检测OA软骨组织和细胞中lncRNA NEAT1和miR-26a的表达水平。CCK-8法检测各组细胞的活力，蛋白免疫印迹法检测各组Caspase1和cleaved-Caspase1蛋白表达及细胞焦亡标志物[NOD样受体蛋白3（NLRP3）、白细胞介素18（IL-18）和切割模式的Gasdermin D（cleaved-Gasdermin D）]的表达。
结果
2
OA软骨组织中lncRNA NEAT1的表达水平高于正常软骨组织（
P
<
0.05），而miR-26a的表达水平低于正常软骨组织（
P
<
0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实，lncRNA NEAT1与miR-26a具有靶向调控作用。与对照组比较，IL-1β组细胞中lncRNA NEAT1、cleaved-Caspase1、NLRP3、IL-18、cleaved-Gasdermin D的表达水平均上调（
P
<
0.05），而miR-26a表达水平下调（
P
<
0.05），细胞活力降低（
P
<
0.05）。与IL-1β+NEAT1-EV组比较，IL-1β+NEAT1-OE组细胞中lncRNA NEAT1、cleaved-Caspase1、NLRP3、IL-18、cleaved-Gasdermin D的表达水平均上调（
P
<
0.05），而miR-26a表达水平下调（
P
<
0.05），细胞活力下降（
P
<
0.05）。与IL-1β+NEAT1-OE+mimic-NC组比较，IL-1β+NEAT1-OE+mimic组细胞中cleaved-Caspase1、NLRP3、IL-18、cleaved-Gasdermin D的表达水平均下调（
P
<
0.05），而miR-26a表达水平上调（
P
<
0.05），细胞活力升高（
P
<
0.05）。
结论
2
lncRNA NEAT1通过靶向抑制miR-26a激活OA软骨细胞中Caspase1介导的焦亡信号轴。
Abstract
Objective
2
To investigate the effect of long non-coding RNA （lncRNA） nuclear enriched abundant transcript 1 （NEAT1） on the chondrocyte pyroptosis signaling axis in osteoarthritis （OA） and its potential mechanism.
Methods
2
Knee joint cartilage tissues were collected from 6 OA patients and 6 healthy individuals. The targeting relationship between miR-26a and lncRNA NEAT1 was predicted by TargetScan 7.2 and StarBase，and the targeting regulatory effect of lncRNA NEAT1 and miR-26a was verified by dual luciferase reporter assays. The cultured chondrocyte lines were divided into the control group （without drug intervention）， IL-1β group （with 10 μg/L of IL-1β for inducing OA in vitro），IL-1β+NEAT1-EV group （with 10 μg/L of IL-1β and transfected with 20 μg/L of NEAT1-EV），IL-1β+NEAT1-OE group （with 10 μg/L of IL-1β and transfected with 20 μg/L of NEAT1-OE）， IL-1β+NEAT1-OE+mimic-NC （with 10 μg/L of IL-1β and co-transfected with 20 μg/L of NEAT1-OE and 50 μg/L of mimic-NC）， and IL-1β+NEAT1-OE+mimic （with 10 μg/L of IL-1β and co-transfected with 20 μg/L of NEAT1-OE and 50 μg/L of miR-26a mimic）. The expression levels of lncRNA NEAT1 and miR-26a in OA cartilage tissues and cells were detected using qRT-PCR. The cell viability was determined using CCK-8 assay. The expression of Caspase1 and cleaved-Caspase1， as well as the pyroptosis markers ［NOD-like receptor family pyrin domain containing 3 （NLRP3）， interleukin-18 （IL-18） and cleaved-Gasdermin D］ were detected using Western blot.
Results
2
In the OA cartilage tissue， the expression level of lncRNA NEAT1 was higher than that in the normal cartilage tissue， while the expression level of miR-26a was lower than that in the normal cartilage group （
P
<
0.05）. The dual luciferase reporter assays confirmed the targeted regulatory effect of lncRNA NEAT1 and miR-26a. Compared with the control group， the IL-1β group showed upregulation of lncRNA NEAT1， cleaved-Caspase1， NLRP3
， IL-18， and cleaved-Gasdermin D expression levels （
P
<
0.05），downregulation of miR-26a expression level （
P
<
0.05），and a decrease of cell viability（
P
<
0.05）.Compared with the IL-1β+NEAT1-EV group， the IL-1β+NEAT1-OE group exhibited upregulation of lncRNA NEAT1， cleaved-Caspase1， NLRP3， IL-18， and cleaved-Gasdermin D expression levels （
P
<
0.05）， downregulation of miR-26a expression level （
P
<
0.05）， and a decrease of cell viability （
P
<
0.05）. Compared with the IL-1β+NEAT1-OE+mimic-NC group， the IL-1β+NEAT1-OE+mimic group showed downregulation of cleaved-Caspase1， NLRP3， IL-18， and cleaved-Gasdermin D expression levels， upregulation of miR-26a expression level （
P
<
0.05）， and an increase of cell viability （
P
<
0.05）.
Conclusion
2
lncRNA NEAT1 activates the chondrocyte pyroptosis signaling axis mediated by Caspase1 in OA by the targeted inhibition of miR-26a.
关键词
Keywords
references
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