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纸质出版:2011
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黄波,王小中,王彩纹,李静,章海斌,熊火梅,肖芸,余佳.bcl-x选择性剪接微基因报告方法的建立[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2011,33(02):210-213.
黄波, 王小中, 王彩纹, et al. bcl-x选择性剪接微基因报告方法的建立[J]. Journal of Army Medical University, 2011, 33(2): 210-213.
黄波,王小中,王彩纹,李静,章海斌,熊火梅,肖芸,余佳.bcl-x选择性剪接微基因报告方法的建立[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2011,33(02):210-213. DOI:
黄波, 王小中, 王彩纹, et al. bcl-x选择性剪接微基因报告方法的建立[J]. Journal of Army Medical University, 2011, 33(2): 210-213. DOI:
目的 利用bcl-x微基因(minigene)构建重要顺式作用元件B2G、CRCE2的突变微基因,建立bcl-x微基因报告法并应用于bcl-x选择性剪接机制的研究。 方法 以构建成功的pcDNA3.1(-)-bcl-x微基因为模板,利用反向PCR的方法,按碱基互补配对原则设计能让顺式元件B2G
CRCE2定点突变的引物,进行PCR反应。PCR反应结束后,用DpnⅠ对模板质粒DNA进行消化,然后使PCR产物发生自身环化反应。将环化产物转化入感受态DH5α,通过筛选并最后利用测序来鉴定所构建突变微基因成功与否。 结果 测序结果鉴定,所克隆的突变微基因序列碱基无一错误突变。并且在HL-60细胞中,RT-PCR实验表明bcl-x顺式作用元件B2G
CRCE2对bcl-xL/bcl-xS有一定影响,pcDNA3.1(-)-bcl-x-B2G(M)转染后RT-PCR电泳显示bcl-xS几乎消失,pcDNA3.1(-)-bcl-x-CRCE2(M)转染后RT-PCR电泳显示bcl-xL/bcl-xS为1.6。 结论 成功构建及应用人类凋亡相关基因bcl-x的突变微基因,顺式作用元件B2G缺失使bcl-xS几乎消失,CRCE2突变使bcl-xL/bcl-xS上升。
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