转录因子EB增强巨噬细胞自噬功能及逆转内毒素耐受的作用

YANG Ting; LIU Xin; JIANG Qingsong; WANG Yujie; SHI Xinhui; YANG Xiong; LIU Sijia; LI Xiaoli

doi:10.16016/j.2097-0927.202410042

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转录因子EB增强巨噬细胞自噬功能及逆转内毒素耐受的作用

Basic Medicine | 更新时间：2025-04-25

- 转录因子EB增强巨噬细胞自噬功能及逆转内毒素耐受的作用
- Journal of Army Medical University Vol. 47, Issue 8, Pages: 794-806(2025)
- 作者机构：
  
  1.重庆医科大学药学院药理学系，重庆高校生物化学与分子药理学重点实验室，重庆
  2.陆军军医大学（第三军医大学）第一附属医院临床研究中心，重庆
- 作者简介：
  
  LI Xiaoli， E-mail： lixiaoli@cqmu.edu.cn
- 基金信息：
  
  the General Program of National Natural Science Foundation of China(82172133);the General Project of Natural Science Foundation of Chongqing(CSTB2022NSCQ-MSX0214)
- DOI：10.16016/j.2097-0927.202410042
  CLC：
- Received：14 October 2024，
  
  Revised：07 November 2024，
  
  Published：30 April 2025
- 稿件说明：
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杨婷,刘鑫,蒋青松,等.转录因子EB增强巨噬细胞自噬功能及逆转内毒素耐受的作用[J].陆军军医大学学报,2025,47(08):794-806.

YANG Ting,LIU Xin,JIANG Qingsong,et al.Transcription factor EB enhances macrophage autophagy and reverses endotoxin tolerance[J].J Army Med Univ,2025,47(08):794-806.
杨婷,刘鑫,蒋青松,等.转录因子EB增强巨噬细胞自噬功能及逆转内毒素耐受的作用[J].陆军军医大学学报,2025,47(08):794-806. DOI：10.16016/j.2097-0927.202410042.

YANG Ting,LIU Xin,JIANG Qingsong,et al.Transcription factor EB enhances macrophage autophagy and reverses endotoxin tolerance[J].J Army Med Univ,2025,47(08):794-806. DOI：10.16016/j.2097-0927.202410042.

摘要

目的

研究转录因子EB（transcription factor EB， TFEB）在内毒素耐受巨噬细胞中的作用。

方法

采用脂多糖（LPS）诱导建立内毒素耐受细胞模型，将RAW264.7细胞分为空白组（Medium组）、5 ng/mL LPS组（LPS 5组）、100 ng/mL LPS组（LPS 100组）、5 ng/mL LPS+100 ng/mL LPS组（Tolerance组）。采用ELISA法检测炎症因子TNF-α和IL-6的释放水平；Western blot和免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3和P62以及TFEB在细胞质和细胞核中的分布；通过慢病毒过表达TFEB或siRNA敲低TFEB后，观察耐受细胞的自噬水平和细菌清除能力的变化。

结果

与LPS 100组相比，Tolerance组细胞炎症因子TNF-α和IL-6的释放水平以及细菌清除能力显著降低（

0.01）；LC3水平降低，P62水平升高，细胞质和细胞核中TFEB的水平均显著降低（

0.01）；过表达TFEB可显著上调Tolerance组细胞中LC3水平，降低P62水平，并增强细菌清除能力（

0.01）。siRNA敲低TFEB对Tolerance组LC3和P62水平以及细菌清除能力无明显影响。

结论

过表达TFEB能恢复内毒素耐受细胞的自噬功能，增强细菌清除能力，从而改善脓毒症的免疫抑制状态，有望成为脓毒症防治的潜在靶点。

Abstract

‍Objective‍　‍To investigate the role of transcription factor EB (TFEB) in endotoxin-tolerant macrophages. Methods‍　The RAW264.7 cells were divided into blank group (DMEM medium)

LPS 5 group (5 ng/mL LPS treatment for 4 h)

LPS 100 group (100 ng/mL LPS treatment for 4 h)

and tolerance group (5 ng/mL LPS for 12 h followed by 100 ng/mL LPS for 4 h). The releases of inflammatory factors TNF-α and IL-6 were measured using ELISA. Western blotting and immunofluorescence assay were used to evaluate the distribution of autophagy-related proteins LC3 and P62

as well as TFEB in the cytoplasm and nucleus. Lentiviral overexpression of TFEB or siRNA-mediated knockdown of TFEB were performed to observe the changes in autophagy levels and bacterial clearance ability in the tolerant cells. Results‍　The cells in the tolerance group had significantly lower contents of TNF-α and IL-6

as well as reduced bacterial clearance ability (

0.01)

down-regulated LC3 expression while up-regulated P62 level

and decreased expression of TFEB in

both the cytoplasm and nucleus (

0.01) when compared with the cells of the LPS 100 group. Overexpression of TFEB significantly increased LC3 level

reduced P62 level

and enhanced bacterial clearance ability in the endotoxin-tolerant cells (

0.01). In contrast

siRNA-mediated knockdown of TFEB had no significant impacts on LC3 and P62 expression levels or bacterial clearance ability. Conclusion ‍　Overexpression of TFEB can restore the autophagy of endotoxin-tolerant cells and enhance their bacterial clearance capacity

thereby alleviating the immunosuppressive state of sepsis. These findings suggest that TFEB holds promise as a potential therapeutic target for the prevention and treatment of sepsis.

关键词

Keywords

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