人胰岛素原基因突变体的构建

兰丽珍; 邓华聪; 孙辽; 郑丹; 郑宏庭; 刘东方; 弓军胜

doi:10.16016/j.1000-5404.2004.19.007

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人胰岛素原基因突变体的构建

更新时间：2026-01-09

- 人胰岛素原基因突变体的构建
- Journal of Army Medical University Vol. 26, Issue 19, (2004)
- 作者机构：
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.16016/j.1000-5404.2004.19.007
  CLC： R346
- Online First：15 October 2004，
  
  Published：2004
- 稿件说明：
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兰丽珍,邓华聪,孙辽,郑丹,郑宏庭,刘东方,弓军胜,人胰岛素原基因突变体的构建[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2004,26(19):0-.

兰丽珍, 邓华聪, 孙辽, et al. 人胰岛素原基因突变体的构建[J]. Journal of Army Medical University, 2004, 26(19).
兰丽珍,邓华聪,孙辽,郑丹,郑宏庭,刘东方,弓军胜,人胰岛素原基因突变体的构建[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2004,26(19):0-. DOI：10.16016/j.1000-5404.2004.19.007

兰丽珍, 邓华聪, 孙辽, et al. 人胰岛素原基因突变体的构建[J]. Journal of Army Medical University, 2004, 26(19). DOI： 10.16016/j.1000-5404.2004.19.007.

摘要

目的　完成人胰岛素原基因的定点突变

使之能在普通细胞中被Furin蛋白酶识别去除C肽分泌成熟胰岛素。方法　采用PCR体外定点突变技术 (PCRsite directedmutagenesis

PCR SDM)

设计 4对引物

引入 5个Furin识别的突变位点

通过重叠延伸法PCR扩增

使人胰岛素原编码基因B10密码子由CAC突变为GAC ;C3密码子由GAA突变为AAA ;C4密码子由GCT突变为CGT ;C3 2密码子由CTT突变为CGT

将扩增片段克隆入T载体并测序。结果　DNA测序结果表明在预期位点突变符合要求。结论　应用PCR诱导突变技术

在体外能准确、简便有效的诱导胰岛素原基因突变

使体外应用非内分泌细胞构建高效分泌成熟胰岛素的细胞克隆成为可能。

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