葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定

郑宏庭; 邓华聪; 蹇锐; 兰丽珍; 方芳

doi:10.16016/j.1000-5404.2004.16.009

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葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定

更新时间：2026-01-09

- 葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定
- Journal of Army Medical University Vol. 26, Issue 16, (2004)
- 作者机构：
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.16016/j.1000-5404.2004.16.009
  CLC： R587.1
- Online First：30 August 2004，
  
  Published：2004
- 稿件说明：
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郑宏庭,邓华聪,蹇锐,兰丽珍,方芳,葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2004,26(16):0-.

郑宏庭, 邓华聪, 蹇锐, et al. 葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定[J]. Journal of Army Medical University, 2004, 26(16).
郑宏庭,邓华聪,蹇锐,兰丽珍,方芳,葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2004,26(16):0-. DOI：10.16016/j.1000-5404.2004.16.009

郑宏庭, 邓华聪, 蹇锐, et al. 葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定[J]. Journal of Army Medical University, 2004, 26(16). DOI： 10.16016/j.1000-5404.2004.16.009.

摘要

目的　构建葡萄糖激酶 (glucokinase

GK)基因逆转录病毒表达载体及稳定的产毒细胞系

为将GK基因应用于糖尿病的基因治疗打下基础。方法　质粒pCMV4 GKZ1经EcoRⅠ BamHⅠ双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体PLXSN

构建成重组逆转录病毒表达载体PLX GK

采用酶切及测序对重组体进行鉴定。而后脂质体转染PLX GK至包装细胞PA3 17

检测培养上清病毒滴度

挑选滴度较高的稳定产毒细胞系并对其行PCR及免疫组化鉴定。结果　构建了GK基因逆转录病毒表达载体PLX GK

经酶切及序列分析证实目的基因插入位点和读码框架正确、无突变 ;建立了稳定产毒细胞系PA3 17 GK

其培养上清平均病毒滴度为 6.8× 10 5cfu ml

最高为 1.8× 10 6 cfu ml

PCR及免疫组化证实GK基因整合入PA3 17 GK细胞基因组并有GK的表达。结论　成功构建了携GK基因的逆转录病毒表达载体及高滴度的稳定产毒细胞系

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