斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定

段文元; 张锡林; 王英

doi:10.16016/j.1000-5404.2004.08.024

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斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定

更新时间：2026-01-09

- 斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定
- Journal of Army Medical University Vol. 26, Issue 8, (2004)
- 作者机构：
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.16016/j.1000-5404.2004.08.024
  CLC： R346
- Online First：30 April 2004，
  
  Published：2004
- 稿件说明：
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段文元,张锡林,王英,斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2004,26(08):0-.

段文元, 张锡林, 王英. 斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定[J]. Journal of Army Medical University, 2004, 26(8).
段文元,张锡林,王英,斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2004,26(08):0-. DOI：10.16016/j.1000-5404.2004.08.024

段文元, 张锡林, 王英. 斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定[J]. Journal of Army Medical University, 2004, 26(8). DOI： 10.16016/j.1000-5404.2004.08.024.

摘要

目的　获得表达斯氏狸殖吸虫半胱蛋白酶基因片段编码多肽

对其免疫反应性作初步研究

在吸虫所致疾病的血清学诊断的应用奠定基础。方法　用PCR法扩增目的基因片段

1%琼脂糖凝胶回收纯化后与PinPointT载体相连

并导入到大肠杆菌JM10 9菌株中去

诱导表达其编码的多肽片段。用裂解液制备抗原标本

经SDS PAGE电泳后

经考马斯亮蓝和生物素链亲合素碱性磷酸酶染色检测其表达情况

Westernblotting鉴定其免疫反应性。结果　转化实验共获得8株阳性重组子

经测序鉴定证实仅 1株正向连接。经过诱导表达

制备重组抗原标本

经SDS PAGE、转膜后生物素链亲和素碱性磷酸酶系统染色显示在 3 2× 10 3处有一融合蛋白条带

反向连接菌株与之相似

也出现一条表达带

但分子量远小于预期值

仅仅 14× 10 3左右。Western blotting显示仅正向连接菌株在 3 2× 10 3的位置有一阳性染色条带。结论　成功的构建了斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶的原核表达载体

经过诱导后表达的重组抗原

具有良好的免疫反应性

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