发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究

王明海; 王锋超; 陆建华; 麦跃; 刘晓宏; 程天民; 粟永萍

doi:10.16016/j.1000-5404.2004.08.001

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发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究

更新时间：2026-01-09

- 发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究
- Journal of Army Medical University Vol. 26, Issue 8, (2004)
- 作者机构：
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.16016/j.1000-5404.2004.08.001
  CLC： R346
- Online First：30 April 2004，
  
  Published：2004
- 稿件说明：
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王明海,王锋超,陆建华,麦跃,刘晓宏,程天民,粟永萍,发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2004,26(08):0-.

王明海, 王锋超, 陆建华, et al. 发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究[J]. Journal of Army Medical University, 2004, 26(8).
王明海,王锋超,陆建华,麦跃,刘晓宏,程天民,粟永萍,发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2004,26(08):0-. DOI：10.16016/j.1000-5404.2004.08.001

王明海, 王锋超, 陆建华, et al. 发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究[J]. Journal of Army Medical University, 2004, 26(8). DOI： 10.16016/j.1000-5404.2004.08.001.

摘要

目的　采用RNA干扰 (RNAinterference

RNAi)技术

通过构建人NF κBp65基因的特异性siRNA真核表达载体

体外观察对NF κB基因的沉默作用

以及对内毒素 (LPS)刺激后NF κB活性的调控作用。方法　采用基因克隆技术

将合成的发卡样特异性p65RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体 (pPUR U6)

构建p65siRNA的表达载体

转染体外ECV 3 0 4细胞

48h后观测胞内NF κBp65亚单位蛋白水平 (Westernblotting)、及对LPS ( 10 μg ml)刺激后NF κB活化的抑制作用。结果　①成功构建发卡样p65siRNA(smallinterfereRNA)真核表达载体 (pPUR U6 p65siRNA) ;②pPUR U6 p65siRNA转染 (脂质体法 )ECV 3 0 4细胞

48h后明显下调胞内P65蛋白水平 ;③转染pPUR U6 p65siRNA的细胞

明显抑制LPS ( 10μg ml)刺激后NF κB的活化。结论　该RNA干扰真核表达载体能明显干扰p65蛋白的表达、释放

进而抑制NF κB的活化

可望进一步抑制细胞的过度炎症反应

减轻创伤组织的受损程度

促进创伤后组织的修复

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