目的　利用大肠杆菌高效表达可溶性具有生物学活性的重组huCT 1蛋白。方法　采用PCR及T A克隆将huCT 1开放阅读框基因克隆到pMD 18T载体上

再构建原核表达载体pGEX2T huCT1。在不同温度不同时间

通过IPTG诱导pGEX2T huCT1在DH5a大肠杆菌中表达

SDS PAGE分析表达量和可溶性蛋白比例。GST亲和柱纯化huCT 1融合蛋白

凝血酶酶切融合蛋白并纯化。坐骨神经切断模型观察重组huCT 1对脊髓前角神经元的存活作用。结果　构建了huCT 1的融合表达载体pGEX2T huCT1。通过IPTG诱导

发现 2 9℃诱导 4h

目的蛋白表达量占全菌的 1 5

可溶性蛋白与包涵体比为 2 5。对其进行亲和柱纯化

GST huCT 1融合蛋白纯度达到 85 %以上。融合蛋白酶切后

重组huCT 1蛋白纯度达到80 %以上。发现原核表达重组huCT 1蛋白能挽救 5 5 %成年大鼠脊髓运动神经元的存活。结论　成功地获取了具有生物活性的huCT 1的原核重组蛋白