p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测

徐祥; 梁华平; 刘昕; 代佳平; 刘琛; 罗艳; 王正国

doi:10.16016/j.1000-5404.2003.02.014

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p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测

更新时间：2026-01-09

- p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测
- Journal of Army Medical University Vol. 25, Issue 2, (2003)
- 作者机构：
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.16016/j.1000-5404.2003.02.014
  CLC： Q78
- Online First：30 January 2003，
  
  Published：2003
- 稿件说明：
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徐祥,梁华平,刘昕,代佳平,刘琛,罗艳,王正国,p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2003,25(02):0-.

徐祥, 梁华平, 刘昕, et al. p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测[J]. Journal of Army Medical University, 2003, 25(2).
徐祥,梁华平,刘昕,代佳平,刘琛,罗艳,王正国,p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2003,25(02):0-. DOI：10.16016/j.1000-5404.2003.02.014

徐祥, 梁华平, 刘昕, et al. p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测[J]. Journal of Army Medical University, 2003, 25(2). DOI： 10.16016/j.1000-5404.2003.02.014.

摘要

目的　获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因

并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法　利用引物二聚体搭桥技术

扩增p65亚基DNA结合域基因片段

并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH10 9

在SD Trp选择培养基上培养

观察转化株的生长情况。按尿素 SDS法抽提酵母蛋白

用SDS PAGE电泳和Western blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株 β 半乳糖苷酶的活性。结果　获得p65DNA结合域基因片段

并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达

对酵母细胞无毒性作用

无自身激活活性。结论　NF κBp65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因

用于肽库筛选

捕捉与之相互作用的多肽

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