腺病毒介导IκBα基因在体外培养U937细胞中的表达及效应研究

王明海; 太光平; 张雅萍; 肖光夏

doi:10.16016/j.1000-5404.2001.12.002

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腺病毒介导IκBα基因在体外培养U937细胞中的表达及效应研究

更新时间：2026-01-09

- 腺病毒介导IκBα基因在体外培养U937细胞中的表达及效应研究
- Journal of Army Medical University Vol. 23, Issue 12, (2001)
- 作者机构：
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- DOI：10.16016/j.1000-5404.2001.12.002
  CLC： R363
- Online First：30 December 2001，
  
  Published：2001
- 稿件说明：
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王明海,太光平,张雅萍,肖光夏,腺病毒介导IκBα基因在体外培养U937细胞中的表达及效应研究[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2001,23(12):0-.

王明海, 太光平, 张雅萍, et al. 腺病毒介导IκBα基因在体外培养U937细胞中的表达及效应研究[J]. Journal of Army Medical University, 2001, 23(12).
王明海,太光平,张雅萍,肖光夏,腺病毒介导IκBα基因在体外培养U937细胞中的表达及效应研究[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2001,23(12):0-. DOI：10.16016/j.1000-5404.2001.12.002

王明海, 太光平, 张雅萍, et al. 腺病毒介导IκBα基因在体外培养U937细胞中的表达及效应研究[J]. Journal of Army Medical University, 2001, 23(12). DOI： 10.16016/j.1000-5404.2001.12.002.

摘要

目的　通过构建IκBα基因的腺病毒表达载体

并用急性相反应蛋白SAA3 启动子来指导目的基因IκBα的表达

体外观察在炎性刺激后IκBα蛋白的诱导性表达特性及对NF κB活性的调控作用

对炎症介质产生的抑制效应。方法　采用DNA重组与同源重组技术

构建含只响应病理信号的启动子急性相反应蛋白启动子SAA3 、目的基因IκBα的炎症诱导性复制缺陷型重组腺病毒载体 (AdIκBα)。应用AdIκBα

选择在炎症反应中具有代表意义的巨噬细胞

观察AdIκBα在体外培养巨噬细胞U93 7中诱导性表达IκBα(Westernblot)、对NF κB活性的调控 (EMSA)及体外效应。结果　①成功构建炎症诱导性IκBα表达质粒 (pAdpLplSAA3 NLSIκBα)

该表达框含SAA3 启动子

SV40 大T抗原核定位信号 (NLS)

IκBαcDNA和ployA ;②pAdpLpLSAA3 NLSIκBα质粒与pJM1 7同源重组

脂质体 (DOTAP)介导

共转染入 2 93细胞。PCR法筛选阳性克隆

获得重组腺病毒 (AdIκBα) ;③用 2 93细胞扩增AdIκBα;采用反复冻融法纯化腺病毒

获得高滴度 (5× 1 0 1 0 pfu/ml)重组腺病毒 ;④体外实验

用 50MOIAdIκBα预感染体外培养的U93 7细胞

再用LPS攻击后

该腺病毒诱导性表达IκBα蛋白 (Westernblot)

且表达的IκBα能抑制NF κB的活化 (EMSA)

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