目的 :筛选出能与HBV DNAC启动子形成三链结构的高亲和力寡核苷酸。方法 :以体外合成的3 2 P标记的HBV DNAC启动子区序列 ( 173 4～ 175 4)为靶序列

合成 5种有可能与该靶序列形成三链结构的寡核苷酸链 (TFO)

同时设计对照靶序列和对照TFO

用凝胶滞留试验、酶足迹试验等方法对比分析这些TFO与靶序列是否形成三链结构及其结合的亲和性、特异性。结果 :在 3 7°C、pH7 4条件下

CT TFO和GT TFOp与3 2 P 靶序列DNA结合的亲和力十分微弱

其Kd均 10 -6mol/L ;GT TFOap和AG TFOs与靶序列DNA结合的亲和力较高

Kd分别为 5× 10 -7mol/L和 2 5× 10 -8mol/L ;AG TFO1与靶序列结合的亲和力最高

Kd为 3× 10 -9mol/L

而且两者的结合具有序列特异性。结论 :含AG或GT的TFO可与HBVC启动子区类同聚嘌呤链逆平行方向结合成三链DNA

其中AG TFO1与靶序列结合的亲和力最高

反应完全

可使靶双链DNA均转变成三链DNA

经一定修饰后

可试用于HBV基因转录抑制实验。