Impact of limonin on necrotic apoptosis of myocardial cells in rats with myocardial infarction by regulating the receptor-interacting protein 1/receptor-interacting protein 3/mixed-lineage kinase domain-like protein signaling pathway

Tian Xixi; Wu Jianfei; Han Siliang; Zhang Yichao; Ma Jing

doi:10.13406/j.cnki.cyxb.003865

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Impact of limonin on necrotic apoptosis of myocardial cells in rats with myocardial infarction by regulating the receptor-interacting protein 1/receptor-interacting protein 3/mixed-lineage kinase domain-like protein signaling pathway

Basic research | 更新时间：2025-10-22

- Impact of limonin on necrotic apoptosis of myocardial cells in rats with myocardial infarction by regulating the receptor-interacting protein 1/receptor-interacting protein 3/mixed-lineage kinase domain-like protein signaling pathway
- Journal of Chongqing Medical University Vol. 50, Issue 8, Pages: 1096-1102(2025)
- 作者机构：
  
  1.河北大学附属医院教育处，保定 071000
  2.河北大学附属医院肝胆外科，保定 071000
  3.河北大学附属医院心血管内科，保定 071000
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.003865
  CLC： R542.2
- Received：16 November 2023，
  
  Revised：2024-04-29，
  
  Accepted：01 April 2025，
  
  Published：28 August 2025
- 稿件说明：
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田晰晰,吴剑飞,韩思梁,等.柠檬苦素调节RIP1/RIP3/MLKL信号通路对心肌梗死大鼠心肌细胞坏死性凋亡的影响[J].重庆医科大学学报,2025,50(8):1096-1102.

Tian Xixi,Wu Jianfei,Han Siliang,et al.Impact of limonin on necrotic apoptosis of myocardial cells in rats with myocardial infarction by regulating the receptor-interacting protein 1/receptor-interacting protein 3/mixed-lineage kinase domain-like protein signaling pathway[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(8):1096-1102.
田晰晰,吴剑飞,韩思梁,等.柠檬苦素调节RIP1/RIP3/MLKL信号通路对心肌梗死大鼠心肌细胞坏死性凋亡的影响[J].重庆医科大学学报,2025,50(8):1096-1102. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003865.

Tian Xixi,Wu Jianfei,Han Siliang,et al.Impact of limonin on necrotic apoptosis of myocardial cells in rats with myocardial infarction by regulating the receptor-interacting protein 1/receptor-interacting protein 3/mixed-lineage kinase domain-like protein signaling pathway[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(8):1096-1102. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003865.

摘要

目的

探究柠檬苦素（limonin，LIM）调节受体相互作用蛋白激酶-1（receptor-interacting protein 1，RIP1）/受体相互作用蛋白激酶-3（receptor-interacting protein 3，RIP3）/混合谱系激酶结构域样蛋白（mixed-lineage kinase domain-like protein，MLKL）信号通路对心肌梗死（myocardial infarction，MI）大鼠心肌细胞坏死性凋亡的影响。

方法

将60只SD大鼠采用随机数字表法分为5组（每组

=12）：假手术组（Sham组）、MI模型组（Model组）、低剂量LIM组（LIM-L组，25 mg/kg LIM）、高剂量LIM组（LIM-H组，50 mg/kg LIM）和LIM高剂量+Nec-1组（LIM-H+Nec-1组，50 mg/kg LIM+0.6 mg/kg Nec-1）。通过结扎大鼠心脏冠脉的方式构建大鼠MI模型。测定大鼠心功能变化。伊红-苏木精染色（hematoxylin-eosin staining，HE）观察大鼠心肌组织病理学变化。2，3，5-三苯基氯化四氮唑（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC）-伊文斯蓝（evans blue，EB）法检测大鼠心肌梗死面积。末端标记法（terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling，TUNEL）检测大鼠心肌细胞坏死性凋亡情况。实时荧光定量PCR（real time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）、Western blot实验检测大鼠心肌组织RIP1/RIP3/MLKL信号通路相关mRNA与蛋白的表达及凋亡相关蛋白表达。

结果

Model组大鼠较Sham组左室射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）、左室收缩压（left ventricular systolic pressure，LVSP）、心肌组织B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）表达降低（均

0.001），左室收缩末期容积（left ventricular end-systolic volume，LVESV）、左室舒张末压（left ventricular end-diastolic pressure，LVEDP）、左室舒张末期容积（left ventricular end-diastolic volume，LVEDV）、心肌梗死面积、细胞凋亡率、心肌组织RIP1、RIP3、MLKL mRNA和蛋白水平、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）、胱天蛋白酶3（cysteinyl aspartate-specific proteinase 3，Caspase3）蛋白表达均明显升高（均

0.001），HE病理切片显示大鼠心肌细胞肿大、排列紊乱，出现坏死和大量炎性细胞浸润。与Model组相比，LIM-H组大鼠相应指标变化与上述相反（RIP1 mRNA：

=0.002，RIP3 mRNA：

=0.008，其余指标均

0.001），大鼠心肌组织病理学损伤和炎性细胞浸润减轻。Nec-1促进了LIM对MI大鼠心肌细胞坏死性凋亡的减轻作用。

结论

LIM可能通过下调RIP1/RIP3/MLKL信号通路减轻MI大鼠心肌细胞坏死性凋亡。

Abstract

Objective

To investigate the impact of limonin（LIM） on the necrotic apoptosis of myocardial cells in rats with myocardial infarction（MI） by regulating the receptor-interacting protein 1 （RIP1）/receptor-interacting protein 3（RIP3）/mixed-lineage kinase domain-like protein（MLKL） signaling pathway.

Methods

A total of 60 Sprague-Dawley rats were randomly divided into sham-operation group（Sham group），MI model group（Model group），low-dose LIM group（LIM-L group，25 mg/kg LIM），high-dose LIM group（LIM-H group，50 mg/kg LIM），and high-dose LIM+RIP1 inhibitor Nec-1 group（LIM-H+Nec-1 group，50 mg/kg LIM+0.6 mg/kg Nec-1），with 12 rats in each group. A rat model of MI was established by ligation of the coronary artery. The changes of cardiac function were examined for each group； HE staining was used to observe the pathological changes of myocardial tissue；the 2，3，5-triphenyltetrazolium chloride-Evans blue method was used to measure myocardial infarct area； the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling method was used to observe the necrotic apoptosis of myocardial cells； quantitative real-time PCR and Western blot were used to measure the expression levels of mRNAs and proteins associated with the RIP1/RIP3/MLKL signaling pathway and the expression of apoptosis-related proteins.

Results

Compared with the Sham group，the Model group had significant reductions in left ventricular ejection fraction，left ventricular systolic pressure，and the expression level of B-cell lymphoma-2（Bcl-2） in myocardial tissue（all

0.001） and significant increases in left ventricular end-systolic volume，left ventricular end-diastolic pressure，left ventricular end-diastolic volume，myocardial infarct area，cell apoptosis rate，the mRNA and protein expression levels of RIP1，RIP3，and MLKL in myocardial tissue，and the protein expression levels of Bcl-2 associated X protein and cysteinyl aspartate-specific proteinase 3 in myocardial tissue（all

0.001），as well as swelling and disordered arrangement of myocardial cells with necrosis and massive inflammatory cell infiltration on HE pathological sections. Compared with the Model group，the LIM-H group showed reverse changes in the above indicators（RIP

1 mRNA：

=0.002，RIP3 mRNA：

=0.008，and the other indexes

were all

0.001），with alleviations of myocardial histopathological injury and inflammatory cell infiltration. Nec-1 promoted the effect of LIM in alleviating the necrotic apoptosis of myocardial cells in MI rats.

Conclusion

LIM may alleviate the necrotic apoptosis of myocardial cells in MI rats by downregulating the RIP1/RIP3/MLKL signaling pathway.

关键词

Keywords

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