Effect of DExH-box helicase 9 O-GlcNAc modification on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells

Luo Huimin; Pi Yubo; Chen Yanmeng; Wang Kai; Tang Ni; Huang Ailong

doi:10.13406/j.cnki.cyxb.003824

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Effect of DExH-box helicase 9 O-GlcNAc modification on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells

Basic research | 更新时间：2025-10-22

- Effect of DExH-box helicase 9 O-GlcNAc modification on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells
- Journal of Chongqing Medical University Vol. 50, Issue 6, Pages: 799-807(2025)
- 作者机构：
  
  重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室，重庆 400016
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.003824
  CLC： R735.7
- Received：24 October 2024，
  
  Revised：2025-01-03，
  
  Accepted：19 January 2025，
  
  Published：28 June 2025
- 稿件说明：
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罗慧敏,皮雨博,陈彦猛,等.DExH-box解旋酶9 O-GlcNAc修饰对HBV相关肝癌细胞增殖能力的影响[J].重庆医科大学学报,2025,50(6):799-807.

Luo Huimin,Pi Yubo,Chen Yanmeng,et al.Effect of DExH-box helicase 9 O-GlcNAc modification on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(6):799-807.
罗慧敏,皮雨博,陈彦猛,等.DExH-box解旋酶9 O-GlcNAc修饰对HBV相关肝癌细胞增殖能力的影响[J].重庆医科大学学报,2025,50(6):799-807. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003824.

Luo Huimin,Pi Yubo,Chen Yanmeng,et al.Effect of DExH-box helicase 9 O-GlcNAc modification on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(6):799-807. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003824.

摘要

目的

研究DExH-box解旋酶9（DExH-box helicase 9，DHX9）的氧连接-N-乙酰葡萄糖胺（O-linked N-acetylglucosamine，O-GlcNAc）修饰对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）相关肝癌细胞增殖能力的影响。

方法

通过分子克隆构建pAdTrack-TO4-DHX9-3Flag重组腺病毒质粒，并将重组腺病毒质粒转染至HEK293细胞中，包装、扩增重组腺病毒AdDHX9。通过免疫共沉淀实验检测DHX9与O-GlcNAc转移酶（O-GlcNAc transferase，OGT）的相互作用，免疫荧光实验研究DHX9与OGT共定位情况。通过琥珀酰化小麦胚芽凝集素（succinylated wheat germ agglutinin，sWGA）和糖基化免疫沉淀实验（immunoprecipitation，IP）检测DHX9 O-GlcNAc修饰水平。通过克隆形成实验和细胞生长曲线探索DHX9 O-GlcNAc修饰对HBV相关肝癌细胞增殖能力的影响。

结果

成功获得了重组腺病毒AdDHX9，经Western blot鉴定了DHX9的表达。DHX9与OGT相互作用，2者共定位于细胞核。sWGA和糖基化IP实验证实了DHX9能够发生O-GlcNAc修饰，并且HBV感染促进了DHX9 O-GlcNAc修饰水平。克隆形成实验显示，与AdGFP对照组（142.667±7.572）相比，AdDHX9组（386.667±15.630）的细胞克隆数量增加（

0.001）。细胞生长曲线结果显示，AdDHX9组（22.860±0.770）比AdGFP对照组（13.670±0.517）的细胞整体生长速率增加（

0.001）。

结论

HBV感染促进DHX9 O-GlcNAc修饰；DHX9 O-GlcNAc修饰增强HBV相关肝癌细胞的增殖能力。

Abstract

Objective

To investigate the effect of DExH-box helicase 9（DHX9） O-linked N-acetylglucosamine（O-GlcNAc） modification（O-GlcNAcylation） on the proliferation of hepatitis B virus（HBV）-associated hepatoma cells.

Methods

The pAdTrack-TO4-DHX9-3Flag recombinant adenovirus plasmid was constructed by molecular cloning and transfected into HEK293 cells for packaging and amplification of the recombinant adenovirus AdDHX9. The interaction between DHX9 and O-GlcNAc transferase（OGT） was confirmed using co-immunoprecipitation. The co-localization between DHX9 and OGT was measured by immunofluorescence. The level of DHX9 O-GlcNAcylation was determined using succinylated wheat germ agglutinin（sWGA） and glycosylated immunoprecipitation （IP）. The effect of DHX9 O-GlcNAcylation on the proliferation of HBV-associated hepatoma cells was assessed using the colony-forming assay and cell growth curves.

Results

The recombinant adenovirus AdDHX9 was successfully obtained，and DHX9 expression was confirmed by Western blot. DHX9 interacted with OGT，and the two proteins were co-localized on the nucleus. The sWGA and glycosylated IP experiments showed that DHX9 underwent O-GlcNAcylation，which was further enhanced by HBV infection. The colony-forming assay demonstrated that the number of cell clones was increased in the AdDHX9 group（386.667±15.630） compared with the AdGFP control group（142.667±7.572，

0.001）. Mo

reover，cell growth curves demonstrated that the overall cell growth rate was enhanced in the AdDHX9 group（22.860±0.770） compared with the AdGFP control group（13.670±0.517，

0.001）.

Conclusion

HBV infection promotes DHX9 O-GlcNAcylation，which enhances the proliferation of HBV-associated hepatoma cells.

关键词

Keywords

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