Synergistic activity and mechanism of vinegar baked radix bupleurum polysaccharides in combination with oxaliplatin
- Journal of Chongqing Medical University Vol. 50, Issue 3, Pages: 303-310(2025)
- 作者机构：
1.广州中医药大学第二附属医院省部共建中医湿证重点实验室，广州 510006
2.广州中医药大学第二临床医学院，广州 510006
3.广东省中医证候临床研究重点实验室，广州 510006
- 作者简介：
- 基金信息：
DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.003745
CLC： R285Received：17 April 2024，
Revised：2024-05-17，
Accepted：29 May 2024，
Published：28 March 2025
- 稿件说明：
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韩明慧,王小双,赵亚,等.醋柴胡多糖联用奥沙利铂增效活性及机制研究[J].重庆医科大学学报,2025,50(3):303-310.
Han Minghui,Wang Xiaoshuang,Zhao Ya,et al.Synergistic activity and mechanism of vinegar baked radix bupleurum polysaccharides in combination with oxaliplatin[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(3):303-310.
韩明慧,王小双,赵亚,等.醋柴胡多糖联用奥沙利铂增效活性及机制研究[J].重庆医科大学学报,2025,50(3):303-310. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003745.
Han Minghui,Wang Xiaoshuang,Zhao Ya,et al.Synergistic activity and mechanism of vinegar baked radix bupleurum polysaccharides in combination with oxaliplatin[J].Journal of Chongqing Medical University,2025,50(3):303-310. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003745.
摘要
目的
2
探讨醋柴胡多糖联用奥沙利铂（oxaliplatin，OXA）增效活性及机制，为临床治疗原发肝细胞癌提供新的思路。
方法
2
噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测醋制柴胡多糖3-4（vinegar baked radix bupleurum polysaccharides 3-4，VBCP 3-4）、醋制柴胡多糖3-3（vinegar baked radix bupleurum polysaccharides 3-3，VBCP 3-3）联用OXA对Huh7细胞的细胞杀伤作用；电感耦合等离子体质谱（inductively coupled plasma mass spectrometry，ICP-MS）检测Huh7细胞对OXA的摄取率，评价醋柴胡多糖VBCP 3-4联用OXA的体外增效途径；蛋白印迹法测定Huh7相关转运蛋白的表达，探讨VBCP 3-4联用OXA的增效机制。
结果
2
VBCP 3-4、VBCP 3-3能够增加OXA对细胞的生长抑制作用。VBCP 3-4能够促进Huh7细胞对OXA的摄取，摄取率在4 h达到峰值，高、低剂量联用组增加摄取率为：分别43.43%（
P
=0.000）和29.02%（
P
=0.000）。OXA低、高剂量组单独作用Huh7细胞，能够促进细胞多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein，MRP）2和MRP1蛋白表达，MRP2蛋白的上调幅度为18.11%、25.00%（
P
=0.008、
P
=0.001），MRP1蛋白的上调幅度为28.51%（
P
>
0.05）、39.70%（
P
=0.015）。VBCP 3-4联用OXA后，MRP2、MRP1及乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）蛋白表达受到抑制，联用高、低剂量组MRP2降低幅度分别为47.38%、15.18%（
P
=0.000、
P
=0.049），MRP1蛋白降低幅度分别为64.96%、34.63%（
P
=0.000、
P
=0.000），联用高剂量组BCRP蛋白表达降低幅度为29.00%（
P
=0.020）；VBCP 3-4单独作用Huh7细胞后，能够明显降低MRP2、MRP1及BCRP蛋白表达，VBCP 3-4高剂量组下调MRP2、MRP1幅度为24.91%、20.79%（
P
=0.004、
P
=0.005）。VBCP3-4下调BCRP蛋白的表达，高、中剂量下调幅度分别为15.02%、13.92%（
P
=0.003、
P
=0.030）。
结论
2
醋柴胡多糖VBCP3-4通过抑制外排型转运蛋白MRP1、MRP2、BCRP表达，促进Huh7细胞摄入OXA，提高胞内有效浓度实现增效作用。
Abstract
Objective
2
To investigate the synergistic activity and mechanism of vinegar baked radix bupleurum polysaccharides（VBCP） in combination with oxaliplatin（OXA），and to provide new ideas for the clinical treatment of primary hepatocellular carcinoma.
Methods
2
MTT assay was used to detect the cytotoxic effect of VBCP 3-4 and VBCP 3-3 in combination with OXA on Huh7 cells；ICP-MS was used to measure the uptake rate of OXA by Huh7 cells and evaluate the
in vitro
synergistic pathway of VBCP 3-4 in combination with OXA； Western blotting was used to measure the expression levels of related transporter proteins in Huh7 cells and explore the synergistic mechanism of VBCP 3-4 in combination with OXA.
Results
2
VBCP 3-4 and VBCP 3-3 enhanced the inhibitory effect of OXA on the growth of cells. VBCP 3-4 promoted the uptake of OXA by Huh7 cells，with the peak uptake rate at 4 hours，and the uptake rate was increased to 43.43% in the high-dose combination group（
P
=0.000） and 29.02% in the low-dose combination group（
P
=0.000）. Acting on Huh7 cells，the low- and high-dose OXA alone could promote the protein expression levels of MRP2 and MRP1 in Huh7 cells，and the protein expression level of multidrug resistance-associated protein（MRP） 2 was upregulated to 18.11% and 25.00%，respectively（
P
=0.008，
P
=0.001），while that of MRP1 was upregulated to 28.51%（
P
>
0.05） and 39.70%（
P
=0.015），respectively. After the combination of VBCP 3-4 and OXA，the protein expression of MRP2，MRP1，and breast cancer resistance protein（BCRP） was inhibited； MRP2 was reduced by 47.38% in the high-dose combination group（
P
=0.000） and 15.18% in the low-dose combination group（
P
=0.049）；MRP1 was reduced by 64.96% in the high-dose combination group（
P
=0.000） and 34.63% in the low-dose combination group（
P
=0.000）； BCRP was reduced by 29.00%（
P
=0.020） in the high-dose combination group. Acting on Huh7 cells alone，VBCP 3-4 significantly reduced the protein expression levels of MRP2，MRP1，
and BCRP，and in the high-dose VBCP 3-4 group，MRP2 and MRP1 were reduced by 24.91% and 20.79%，respectively（
P
=0.004，
P
=0.005）. VBCP 3-4 downregulated the protein expression level of BCRP by 15.02% in the high-dose group（
P
=0.003） and 13.92% in the middle-dose group（
P
=0.030）.
Conclusion
2
VBCP 3-4 exerts a synergistic effect by inhibiting the expression of the efflux transporter proteins MRP1，MRP2，and BCRP，promoting the intake of OXA by Huh7 cells，and increasing the intracellular effective concentration.
关键词
Keywords
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