The comparison of enrichment effects of different screening schemes for fetal nucleated red blood cells from maternal blood by magnetic-activated cell sorting
- Journal of Chongqing Medical University Vol. 48, Issue 2, Pages: 155-161(2023)
- 作者机构：
1.西安交通大学第一附属医院妇产科，西安 710000
2.西安交通大学医学部，西安 710000
- 作者简介：
- 基金信息：
DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.003167
CLC： R714Received：03 January 2022，
Revised：2022-04-12，
Accepted：15 June 2022，
Published：28 February 2023
- 稿件说明：
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唐苗苗,宾雅棣,赵蓝波,等.基于免疫磁珠法的不同筛选方案对胎儿有核红细胞富集效果的比较[J].重庆医科大学学报,2023,48(02):155-161.
Tang Miaomiao,Bin Yadi,Zhao Lanbo,et al.The comparison of enrichment effects of different screening schemes for fetal nucleated red blood cells from maternal blood by magnetic-activated cell sorting[J].Journal of Chongqing Medical University,2023,48(02):155-161.
唐苗苗,宾雅棣,赵蓝波,等.基于免疫磁珠法的不同筛选方案对胎儿有核红细胞富集效果的比较[J].重庆医科大学学报,2023,48(02):155-161. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003167.
Tang Miaomiao,Bin Yadi,Zhao Lanbo,et al.The comparison of enrichment effects of different screening schemes for fetal nucleated red blood cells from maternal blood by magnetic-activated cell sorting[J].Journal of Chongqing Medical University,2023,48(02):155-161. DOI： 10.13406/j.cnki.cyxb.003167.
摘要
目的
2
将密度梯度离心（density gradient centrifugation，DGC）与免疫磁珠法（magnetic-activated cell sorting，MACS）相结合，应用4种不同的筛选方案，对脐血中的胎儿有核红细胞（fetal nucleated red blood cells，FNRBC）进行分离，评估不同策略富集FNRBC的效果。
方法
2
对10例脐血标本（12 mL/例）按4种不同方案进行筛选：DGC；DGC+MACS阴性筛选（CD45
-
）；DGC +MACS阳性筛选（CD71
+
）；DGC+MACS阴性/阳性筛选（CD45
-
/CD71
+
）。通过细胞计数板计数，K-B染色后显微镜下人工FNRBC计数，从获得总细胞量、FNRBC量和FNRBC比例经
t
检验后评估不同方案富集FNRBC的效果。
结果
2
①与其他3组相比，DGC方案可获得的总细胞量（0.95×10
7
/mL）最多，FNRBC数量（39.87/mL）最多，FNRBC比例最低（0.004‰），差异均具有统计学意义（均
P
=0.000）；②与其他3组相比，DGC+MACS阴性/阳性筛选（CD45
-
/CD71
+
）组合法所获得的总细胞量最少（0.81×10
6
/mL），获得FNRBC数量也最少（7.47/mL），差异均具有统计学意义（均
P
=0.000）；③DGC+MACS单种抗体筛选方案中，DGC+MACS阳性筛选（CD71
+
）所获得总细胞量为1.99×10
6
/mL，较DGC+MACS阴性筛选（CD45
-
）（2.56×10
6
/mL）低，差异有统计学意义（
P
=0.000），而两方案所得FNRBC数量之间差异无统计学意义（
P
=0.910）；④DGC+MACS阴性筛选（CD45
-
），DGC+MACS阳性筛选（CD71
+
），DGC+MACS阴性/阳性筛选（CD45
-
/CD71
+
）所得FNRBC比例之间差异无统计学意义（
P
=0.030、0.050、0.210）。
结论
2
DGC方案获得FNRBC数量最多；DGC+MACS阴性/阳性筛选（CD45
-
/CD71
+
）方案去除混杂细胞能力最强。在不降低获取目标细胞数量基础上，DGC+MACS阳性筛选（CD71
+
）方案富集FNRBC效果最好。
Abstract
Objective
2
To isolate fetal nucleated red blood cells（FNRBC）from maternal umbilical cord blood through density gradient centrifugation（DGC）and magnetic-activated cell sorting（MACS） by four different screening schemes，and to evaluate the screening effect of different methods.
Methods
2
Ten samples of umbilical cord blood（12 mL/case）were collected. Each sample was divided into 4 groups：Group 1：DGC； Group 2：DGC+MACS negative screening（CD45
-
）；Group 3：DGC+MACS positive screening（CD71
+
）；Group 4：DGC+MACS negative/positive screening（CD45
-
/CD71
+
）. After screening，the number of cells was counted，and the
t
-test was carried out to evaluate the enrichment efficiency of each method. K-B staining was used to identify FNRBC count，and then the number and the proportion of FNRBC were calculated.
Results
2
①Compared with the other three groups，DGC method had the largest total cell number（0.95×10
7
/mL），the largest FNRBC number（39.87/mL） and the lo
west proportion of FNRBC（0.004‰），with statistically significant differences（
P
=0.000）；②DGC+MACS negative / positive screening（CD45
-
/CD71
+
） method got the least total cells number（0.81×10
6
/mL）and the least FNRBC number（7.47/mL），with statistically significant differences（
P
=0.000）；③In the DGC+MACS single antibody screening method，the total number of cells（1.99×10
6
/mL）obtained by DGC+MACS positive screening（CD71
+
） was lower than that by DGC+MACS negative screening（CD45
-
）（2.56×10
6
/mL）. The difference was statistically significant（
P
=0.000）. However，there was no significant difference in the number of FNRBC between the two methods（
P
=0.910）；④There was no significant difference in the proportion of FNRBC between DGC+MACS negative screening（CD45
-
），DGC+MACS positive screening（CD71
+
） and DGC+MACS negative/positive screening（CD45
-
/CD71
+
）（
P
=0.030，0.050，0.210）.
Conclusion
2
The number of FNRBC obtained by DGC is the largest. DGC+MACS negative/positive screening（CD45
-
/CD71
+
）has the strongest ability to remove mixed cells. The effect of enriching FNRBC by DGC+MACS positive screening（CD71
+
） is the best without reducing the number of target cells.
关键词
Keywords
references
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