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Published:2005,
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[J]. null (2):1(2005)
DOI:
[J]. null (2):1(2005) DOI:
目的 克隆人趋化因子MIP-3α基因,表达并初步纯化MIP-3α融合蛋白。方法从扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3a成熟蛋白基因,并在5’和3’分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli.DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得MIP-3α天然蛋白表达载体pET32a(+)/MIP-3α,SDS-PAGE分析其表达,Westernblot验证融合蛋白。大量表达并初步纯化MIP-3α融合蛋白。结果 成功克隆了MIP-3α基因,表达并初步纯化得到MIP-3α融合蛋白。结论构建的MIP-3α硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式表达MIP-3α硫氧还蛋白。
MIP-3α 融合表达 载体 Western blot 蛋白纯化
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