目的研究单孔胸腔镜肺段切除术患者术前应用三维重建联合荧光染色法的效果，旨在为单孔胸腔镜肺段切除术提供技术支持，改善患者预后。方法纳入我院收治的66例肺结节患者，根据手术方法不同将患者分为对照组和观察组，每组33例。对照组患者采用传统膨胀萎陷法单孔胸腔镜肺段切除术治疗；观察组患者采用术前三维重建联合荧光染色法单孔胸腔镜肺段切除术治疗。观察2组患者手术情况、术后情况以及并发症发生情况。结果观察组手术时间和段间交界面出现时间短于对照组，术中出血量少于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；2组患者淋巴结清扫个数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组术后拔管时间、术后住院时间短于对照组，总引流量少于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。观察组并发症发生率仅为6.06%，明显低于对照组的27.27%，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论应用术前三维重建联合荧光染色法进行单孔胸腔镜肺段切除术能快速、清晰地显示肺段间交界面，为手术提供技术支持，可缩短手术时间，减少术中出血量，安全性相对较高，值得临床应用及推广。