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Published:2009
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周静,姜政,孙伟,陶小红,黄爱龙,王丕龙.人脂联素真核表达载体的构建及其表达[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2009,31(14):1413-1414.
周静, 姜政, 孙伟, et al. 人脂联素真核表达载体的构建及其表达[J]. Journal of Army Medical University, 2009, 31(14): 1413-1414.
周静,姜政,孙伟,陶小红,黄爱龙,王丕龙.人脂联素真核表达载体的构建及其表达[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2009,31(14):1413-1414. DOI:
周静, 姜政, 孙伟, et al. 人脂联素真核表达载体的构建及其表达[J]. Journal of Army Medical University, 2009, 31(14): 1413-1414. DOI:
目的 构建人脂联素的真核表达载体,并检测其融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。 方法 从人脂肪组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得人脂联素基因,将其克隆到真核荧光表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-N1-AdipoQ,转染至真核表达细胞COS-7中,并通过SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白在真核细胞中的表达。 结果 通过RT-PCR方法克隆人脂联素基因744 bp,测序结果显示,1个碱基发生突变,654位:A→T,突变率为0.1%,氨基酸Glu→Asp。通过SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白分子质量约为55×10
3
(绿色荧光蛋白分子质量约为27×10
),说明脂联素基因在真核细胞中表达并与绿色荧光蛋白融合。 结论 成功的构建了真核表达载体,并在真核细胞中表达。
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